用血细胞仪计数酵母细胞

介绍

血球计已经成为血液学家,医学从业人员,生物学家和现在酿酒和乙醇生产研究人员的重要工具。酵母是一种经济上重要的生物,用于乙醇生产、饮料和替代燃料工业以及烘焙工业中的发酵剂。在酵母生产、发酵过程和用于监测致病酵母增殖的杀菌剂研究中,浓度和活力的测定是常规进行的质量控制目的。

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用血细胞仪进行人工细胞计数

第一步。准备血细胞仪

用70%醋酸乙酯清洗血球计和玻璃盖玻片。

第二步。准备样品和装载

将玻璃罩盖盖在计数室上。

移液管取10微升细胞样本入血球计。

步骤3。手动计数样本中的单元格

将血球计置于典型放大倍数为100的显微镜下。

同时关注网格图案和细胞粒子,并计算在4个大角正方形中发现的细胞总数。

如果单元格接触到一个角正方形的4个周长边,只计算2个边的单元格,无论是2个外边还是2个内边。

步骤4。血细胞计的细胞计算与处理

将稀释系数乘以细胞总数,再除以已计数的角方格数,再乘以104获得细胞浓度(cells/ml)。

用70%醋酸乙酯清洁血球计和玻璃盖玻片。

用血球计手工测定细胞活力

用亚甲基蓝测定酵母细胞活力

一般来说,亚甲基蓝用于测定酵母活力/活力。亚甲基蓝是一种异色染料,其分子质量为319.85 g/mol。具有脱氢酶活性的代谢活性活酵母细胞可以将亚甲基蓝转化为无色物质,而死亡细胞保持染色时的蓝色。因此,可以使用血球计手工计数活的和死的酵母细胞,以确定酵母细胞浓度和活力。有关酵母分析的更多信息,请访问“酵母浓度与活力”网页。

亚甲蓝协议

亚甲蓝准备

步骤1。将亚甲基蓝溶解在柠檬酸钠溶液中(2% w/v)至最终浓度0.01% (w/v)

步骤2。用0.2微米过滤器过滤亚甲基蓝

血细胞计数器的准备

步骤3。用70%醋酸乙酯清洗血球计和玻璃盖玻片

步骤4。将玻璃罩盖盖在计数室上

细胞计数方法

第5步。将目标酵母细胞悬液旋涡,与0.01%亚甲基蓝1:1混合

步骤6。用移液管将10微升细胞样本移入血细胞仪

第七步。等60秒让细胞静置

手动计数样本中的单元格

步骤8.将血球计置于典型放大倍数为100的显微镜下

第9步。将焦点集中在网格图案和单元粒子上,并计算在4个大角正方形中找到的单元总数。如果单元格与角正方形的4条周长边接触,则只计算2条边上的单元格,即2条外侧或2条内侧

第10步。计数活酵母细胞(不含亚甲基蓝)和死酵母细胞(含亚甲基蓝)

血细胞计的细胞计算与处理

步骤11。将稀释系数乘以细胞总数,再除以已计数的角方格数,再乘以104获得细胞浓度(cells/ml)

步骤12。用70%乙醇清洁血细胞仪和玻璃盖玻片

全核计数的结晶紫协议

结晶紫的协议

结晶紫制备

步骤1。将1.9212 g溶于100ml蒸馏水中,制得0.1 M柠檬酸

步骤2。溶解0.005 g结晶紫(又称碱性紫3或龙胆紫),制得0.1 M含0.01% (w/v)结晶紫的柠檬酸;C.I. 42555)加入步骤1制备的0.1 M柠檬酸50 mL中

血细胞计数器的准备

步骤3。用70%醋酸乙酯清洗血球计和玻璃盖玻片

步骤4。将玻璃罩盖盖在计数室上

细胞计数方法

第5步。将靶细胞悬液500±50 g离心5 ~ 10分钟。

步骤6.轻轻倒出上层清液。在细胞颗粒中加入1.0 mL 0.1M柠檬酸溶液。混合均匀,在35°C孵育1 - 2小时

第七步。用剧烈震动分离细胞核,1000±100 g离心20 ~ 25分钟

第八步。丢弃上层清液。将细胞微球重新悬浮在0.5 - 1.0 mL柠檬酸-结晶紫溶液中

第9步。用移液管将10微升细胞样本移入血细胞仪

第十步.等60秒让细胞静置

手工计数样品中的细胞核

步骤11。将血球计置于典型放大倍数为100的显微镜下

步骤12。聚焦于网格图案和细胞颗粒,并计算在4个大角正方形中发现的细胞核总数

步骤13.如果细胞核接触到一个角正方形的四个周长边,只数两个边的细胞,两个边或两个内边

第14步。数活核(用结晶紫)

血细胞仪的细胞核计算与清洗

步骤15。稀释系数乘以核的总数,除以计算的角落方块的数量,再乘以104获得细胞浓度(cells/ml)

步骤16。用70%乙醇清洁血细胞仪和玻璃盖玻片