GFP转染的定量测量

GFP介绍

绿色荧光蛋白(GFP)是在水晶水母,Aequorea Victoria中鉴定的26.9kDa蛋白。发现,当暴露于蓝色或紫外线时,蛋白质荧光。在1994年首次在大肠杆菌中首次表达GFP之后,很快就证实了GFP也可以在其他生物中成功表达。从那时起,不仅产生了许多不同颜色的荧光蛋白,而且它们的功能得到增强,以提供更快和更强的荧光信号。

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GFP应cf欧洲杯竞猜用程序

  • 绿色荧光蛋白常被用作基因或蛋白质表达的报告基因。通过检测GFP的表达,可以量化转染/转导效率。
  • 通过碘化丙啶染色细胞,我们可以监测培养的活力,在GFP表达。
  • 在用GFP和RFP共同转导的培养物中,Celloromet具有捕获,分析和报告GFP阳性,RFP阳性或双积极的群体的能力。

获取GFP表达效率

通过芯线仪视觉CBA,将20μl样品加入槽计数室。GFP表达的成像和分析在不到60秒的时间内完成。可以观察明场和荧光细胞图像以检查细胞形态并验证细胞计数。自动显示总细胞计数,浓度和平均直径。

在4个简单的步骤中量化GFP效率

1.移液管20μl样品到一次性载玻片中。

2.将滑块插入仪器

3.从下拉菜单中选择“测定”

4.单击计数,获取图像和查看细胞计数,浓度,直径和GFP阳性细胞的百分比

293T细胞中的GFP表达

自动测量人群中GFP阳性细胞的数量和百分比。

明亮视野和荧光293T细胞图像

计数 专注 平均直径
BR1: 1058 1.52×10 ^ 6细胞/ ml 15.2微米
GFP:594 8.56×10 ^ 5细胞/毫升 16.8微米
GFP阳性56.4%

RWPE-1细胞中的RFP表达

自动测量人口中RFP阳性细胞的数量和百分比。

明亮的场和荧光RWPE-1细胞图像

计数 专注 平均直径
BR1: 1216 1.77×10 ^ 6细胞/ ml 19.6微米
招标书:596 8.70×10 ^ 5细胞/毫升 21.2微米
RFP阳性49.2%

小鼠胚胎干细胞中的GFP表达和碘化钛活力

通过向GFP表达测定添加PI来监测细胞健康。DEAD,PI阳性细胞的数量和百分比与GFP表达读数一起显示。

小鼠胚胎干细胞的明亮场和荧光细胞图像

计数 专注 平均直径 比率
GFP:452个细胞 1.29×10 ^ 6个细胞/ ml 12.2微米 GFP阳性:17.7%
PI阳性:46.7%
双重积极:0.1%
pi:1203细胞 3.39×10 ^ 6细胞/ ml 9.4微米
BR总细胞:2570个细胞 7.26×10 ^ 6个细胞/ ml 10.0微米

GFP/RFP在t细胞中的共表达

图像分析双阳性GFP / RPF细胞群。Cellometer自动报告每个人口以及双阳性细胞的数量和百分比。

亮场和荧光t细胞图像

计数 专注 平均直径 比率
GFP: 368个细胞 5.20×10 ^ 5细胞/毫升 10.3微米 GFP阳性:38.4%
RFP阳性:69.5%
双阳性:38.2%
招标书:667个细胞 9.42×10 ^ 5细胞/毫升 10.1微米
总细胞数:962个细胞 1.36×10 ^ 6个细胞/ ml 9.0微米

检测表达GFP信号弱的细胞

在流式细胞仪软件FCS Express中导出和分析Cellometer捕获的数据。通过绘制GFP信号的平均荧光强度,我们可以确定原发性骨髓样品中的GFP阳性细胞的百分比。

使用FCS Express软件量化GFP表达

亮场计数图像

荧光图像

其他荧光蛋白

对于Cellometer Vision CBA,可定制的荧光光学模块可用于特定的荧光蛋白。

用于荧光蛋白检测的荧光光学模块

光学模块 荧光团 核酸污渍 荧光蛋白
VB-450-302
前:375纳米
EM:450 nm
AlexaFluor®350 DAPI.
Hoechst 33342.
Hoechst 33258.
BFP.
CFP.
VB-535-402
前:475 nm
嗯:535 nm
Calcein.
菲特
Alexafluor®488.
AO(吖啶橙,+ DNA)
Syto®9,Syto®13.
GFP.
YFP
vb - 595 - 502
例:525海里
新兴市场:595海里
AlexaFluor®546.
Alexafluor®555,Cy3®
PE(r-phycoerythrin)
罗丹明B.
π(propidium碘)
EB(溴化乙锭)
Sytox®橙色
57.5
rfp.
VB-660-503
前:540 nm
EM:660 nm
AlexaFluor®447.
7-AAD.
尼罗河红色
π(propidium碘)
EB(溴化乙锭)
AO(吖啶橙,+ RNA)
Ds红
TdTomato
VB-695-602
例:630海里
嗯:695 nm
Alexafluor®447,Cy5®
APC(均蛋白粘蛋白)
Sytox®Red. 赤红

*本表是兼容荧光团、核酸染色剂和荧光蛋白的部分列表。关于其他试剂的兼容性,请与Nexcelom技术支持联系。

Sytox、AlexaFluor和Cy是Life Technologies的商标

各种哺乳动物细胞中的GFP表达

这里展示的是几个表达绿色荧光蛋白的细胞系的例子。每一种细胞类型都采集了明亮的视野和GFP图像。

明亮视野和荧光COS-7细胞图像

明亮视野和荧光COS-7细胞图像

亮场和荧光HeLa细胞图像

亮场和荧光HeLa细胞图像

明亮的场和荧光H1299细胞图像

明亮的场和荧光H1299细胞图像

酵母中的GFP表达(通过Vision 10x测量)

结论与细胞测量仪的选择

细胞仪图像流式细胞术可以有效地测定GFP或其他荧光蛋白转导/转染效率。此外,它不仅可以用于研究表达gfp的哺乳动物细胞系,也可以用于研究表达gfp的酵母细胞。这个强大的仪器平台和独立的软件解决方案为研究人员提供了检测强和弱荧光信号的能力。

请联系申请专家以确定哪些Cellometer适合您!

使用Cellometer进行GFP检测的出版物

  1. 何玉强,志宏杰,德比亚索D,施敏,詹志忠。(2012) htliv -1税收诱导的快速衰老是由NF-kappa B的转录活性驱动的,依赖于长期激活的IKK α和p65/RelA。病毒学杂志86(17):9474-9483
  2. Glazer ES, Zhu CH, Massey KL, Thompson CS, Kaluarachchi WD, Hamir AN, Curley SA。(2010)靶向金纳米颗粒治疗胰腺腺癌异种移植物的无创射频场破坏。临床癌症研究16(23):5712-5721
  3. 作者简介:谢德龙(1985 -),男,博士生导师。(2011) PTEN的缺失允许cxcr4介导的前列腺癌细胞通过ERK1/2发生肿瘤。分子癌症研究9(1):90-102
  4. Miller D,Reynolds Ge,Mejia R,Stark JM,Murnane JP。(2011)哺乳动物细胞中的伯质区域缺乏DNA双链断裂修复。DNA修复10(5):536-544
  5. 关键词:甲型H1N1/2009流感病毒,高致病性H5N1病毒,低致病性H5N2病毒,NS1蛋白,细胞前mRNA聚腺苷化,mRNA翻译生物化学杂志286(9):7239-7247