过继细胞转移治疗

过继细胞移植疗法简介

新的癌症免疫疗法有了显著的增长。《科学》杂志将2013年的癌症免疫疗法称为“年度突破”,《自然》杂志发表了题为《召唤细胞武装起来》的展望文章。这些出版物突出了癌症免疫治疗研究领域的进展和增长。疫苗疗法、抗体疗法、免疫检查点抑制剂和过继细胞转移疗法都是免疫疗法研究领域的策略,旨在增强免疫系统对抗癌症的能力。

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过继细胞转移(ACT)疗法侧重于使用患者自己的细胞进行治疗。在ACT疗法中,有三种主要的治疗方法,利用细胞直接靶向和刺激免疫系统:肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、t细胞受体(TCR)和嵌合抗原受体(CAR)疗法。尽管刺激免疫系统的方法不同于另一种疗法,但它们都使用和需要初级的、纯化的和临床的样本。无论是用于ELISA或增殖试验的电镀细胞,还是用于从人源小鼠中分离TCR的工作,这些样品都经过常规处理和再处理,用于下游实验。在每个步骤中,细胞活力和浓度的测量仍然是免疫治疗发展过程中的一个重要因素。

测定细胞浓度和活力

用台盼蓝测定细胞浓度和活力

每台Cellometer仪器都能执行台盼蓝排除方法。细胞用台台蓝染色后,将样品装入计数腔载玻片,Cellometer仪器自动捕捉和分析多个细胞图像。几秒钟内,结果表显示活细胞、死细胞和总细胞浓度、存活率百分比以及平均细胞大小。

台盼蓝协议

  1. 用PBS将高汤(0.4%)稀释至0.2%。
  2. 用0.2微米的滤光片过滤台盼蓝
  3. 细胞悬液以1:1与0.2%台盼蓝混合
  4. 将计数室放入测压仪并进行分析

简单,用户友好的Cellometer程序

1.吸管20µl 2。插入幻灯片3。选择“分析”并单击“计数”
4.结果在30秒!

用吖啶橙/碘化丙啶(AO/PI)测定细胞浓度和活力

双荧光仪器(Cellometer Vision, Auto 2000和K2)能够在不需要进行红细胞裂解的情况下测量临床样本中有核细胞的浓度和活力。只需将20µl的样品加入Cellometer计数室。样品的成像和分析在30秒或更少的时间内完成。可以查看明亮的视野和荧光细胞图像,以检查细胞形态和验证细胞计数。细胞总数,浓度和平均直径自动显示每个计数样品。

AO /π协议

  1. 获得ViaStain™AO/PI溶液:请参阅我们的试剂部分
  2. AO/PI溶液1:1染色细胞
  3. 载荷计数箱滑动并分析

1.将20µl的样品移液到一次性载玻片中。

2.将幻灯片插入仪器

3.从下拉菜单中选择分析

4.点击计数,获取图像并查看细胞计数,浓度,直径

过继细胞移植治疗中使用Cellometer计数的人和动物细胞

人类黑色素瘤消化

肿瘤浸润性淋巴细胞(TILs)分离的第一步是肿瘤标本的切除和消化。

  • 用Cellometer测定TILs的浓度和活力,用于肿瘤消化后的t细胞分离。
  • 我们推荐使用AOPI来测量细胞活力

AOPI染色的人类黑色素瘤消化样本

孤立的t细胞

TIL分泌IFNγ表明分离的t细胞对肿瘤的特异性反应。采用ELISA法检测高水平的干扰素-γ (ifn -γ)。

  • 使用Cellometer测定酶联免疫吸附试验所需的t细胞浓度和活力。
  • 我们推荐使用AOPI或TB来测量细胞活力

AOPI染色分离t细胞

收获的脾细胞

用肿瘤特异性抗原免疫小鼠。收集小鼠血清和脾细胞用于B细胞分离

  • 使用Cellometer测定收集的脾细胞的浓度和活力
  • 我们推荐使用AOPI来测量细胞活力

收获的脾细胞AOPI染色

孤立的b细胞

扩大选择的b细胞克隆用于杂交瘤的生产。

  • 用Cellometer测定产生抗体杂交瘤b细胞的浓度和活力。
  • 我们推荐使用AOPI或TB来测量细胞活力

AOPI染色分离b细胞

HEK 293个细胞

利用包装细胞株(hek293)进行病毒载体的生产

  • 使用Cellometer来确定用于病毒载体生产的种子所需的细胞浓度。
  • 使用Cellometer来确定为检测产生的病毒载体而播种所需的细胞浓度。
  • 我们推荐使用AOPI或TB来测量细胞活力

hek293细胞台盼蓝染色

人类PBMCs

收集患者外周血淋巴细胞进行t细胞分离。

  • 使用Cellometer测定收集的PBMC样品的活力和浓度。
  • 白细胞分离+ Ficoll梯度后检测样品浓度和活力
  • 我们推荐使用AOPI来测量细胞活力

AOPI染色的人t细胞

孤立的人类t细胞

病人纯化的t细胞通常在转导或转染含有癌症特异性t细胞受体的载体之前被冷冻保存。

  • 冷冻前用Cellometer检测细胞浓度和活力
  • 用Cellometer检测样品解冻后的浓度和活力
  • 在准备转导/转染时,使用Cellometer检查活力并确定最佳的细胞浓度
  • 使用Cellometer检测细胞增殖过程中的细胞活力和浓度
  • 我们推荐使用AOPI或TB来测量细胞活力

AOPI染色的人t细胞

台盼蓝染色人t细胞

该仪器的Cellometer线可以快速、准确地获得细胞样品的生存能力,台盼蓝或荧光法。此外,该系统自动报告准确的细胞计数,浓度和细胞大小在单个20µl检测。基于荧光的Cellometer仪器(Auto 2000、Vision和K2)也允许研究人员计算新鲜临床样本中有核细胞的总数,而不需要溶解红细胞。下表概述了推荐的Cellometer仪器和每种选择应用的分析用途。

细胞类型 推荐的生存能力检测方法
台盼蓝 AOPI
杂种细胞细胞
293 t细胞
t细胞扩张
肿瘤消化
孤立的b细胞
脾细胞——新鲜
红细胞溶解后的脾细胞
PBMC,孤立
PBMC,新鲜
馈电单元(K562单元)

用Cellometer进行过继细胞转移治疗的分析

扩散分析

通过IL-21信号重编程cd19特异性T细胞可以改善b系恶性肿瘤的过继免疫治疗。Harjeet Singh等人。癌症研究;71(10) 2011年5月15日。

“在IL-2 (n=4)或IL-2和IL-21 (n=7)存在的情况下,γ辐照aAPC培养28天的t细胞生长速率。随着时间的推移,CAR+ t细胞的总数量不断繁殖。”

每7天计数一次T细胞,并使用Cellometer自动细胞计数器(Auto T4 cell counter, Nexcelom Bioscience)基于台班蓝排除进行活细胞计数。乐动体育-南安普顿合作伙伴在电穿孔时和共培养过程中,分别使用“PBMC_human_frozen”和“activated T cell”程序在Cellometer上计数细胞。

转导/转染hek293细胞后GFP阳性细胞百分比

  • hek293细胞在烧瓶中培养
  • 将含有eGFP报告基因的慢病毒载体以不同浓度添加到细胞中:对照组(无病毒载体)、样本1和样本2(如下图所示)。
  • 孵育一段时间后,收集细胞并用Cellometer Vision处理
  • 转导百分数=(总GFP+细胞数/总亮场细胞数)× 100
慢病毒转导 总细胞 GFP阳性 % GFP阳性
示例1 1244 718 58.0%
示例2 1404 337 24.1%
控制 1188 0 0.00%

控制

示例1

示例2

结论

Cellometer仪器能够对培养细胞株和原代细胞株进行浓度、活力和细胞大小的测量,以及在癌症免疫治疗发展过程中常规使用的更复杂的基于细胞的检测。通过亮场和荧光平台,这些强大的仪器能够对各种样品进行一致和准确的细胞测量。双荧光单位(Auto 2000, K2和Vision)能够在不需要进行红细胞裂解的情况下测量临床样本中有核细胞的浓度和活力。对于分离或纯化的细胞样本,亮视野台台蓝Cellometers (Mini, Auto 1000,和T4)获取多个图像,并自动报告存活率,细胞浓度和平均直径在30秒内。这些仪器涵盖了研究人员在免疫治疗领域可能需要的每一个细胞计数。

请打978-327-5340给我们。有经验的Nexcelom应用专家cf欧洲杯竞猜美国东部时间上午8:30到下午5:30协助选择Cellometer系统。

使用Cellometer进行过继细胞转移治疗研究的出版物

  1. 吴建勇,李晓东,李晓东,等。(2012)增强多发性骨髓瘤自体免疫效应细胞的新型动员策略前沿生物科学(精英教育)3: 1500 - 1508
  2. Singh H, Figliola MJ, Dawson MJ等(2011)通过IL-21信号重编程cd19特异性T细胞可以改善b系恶性肿瘤的过继免疫治疗。癌症研究71(10): 3516 - 27所示
  3. Manuri PV, Wilson MH, Maiti SN, et al. (2010) piggyBac转座子/转座酶系统产生cd19特异性T细胞治疗b系恶性肿瘤。人类基因治疗21(4): 427 - 37。

要查看引用用于AOPI或TB测量细胞活力的Cellometer仪器的出版物,请参阅我们的Viabilty应用程序页面。