昆虫细胞

昆虫细胞分析导论

虽然有许多昆虫细胞被常规研究和用于研究,但最常见的是Sf9细胞系。最初源自草地贪夜蛾(秋粘虫),适于细胞培养。Sf9细胞对杆状病毒高度敏感,杆状病毒在培养的昆虫细胞中广泛用于特定基因的表达。这些基因的表达导致Sf9细胞产生大量蛋白质。在这个蛋白表达过程中,了解Sf9细胞的浓度和活力对于健康转染和蛋白质生产都是至关重要的。仪器的Cellometer线测量细胞浓度和活力以及细胞大小。由于细胞大小与健康的病毒感染和蛋白质表达有关,测量和监测细胞大小是监测细胞培养健康的有效工具。

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测定昆虫细胞系Sf9、Sf21和High 5的细胞大小和活力

Cellometer Auto T4用于计算细胞浓度和活力,也用于分析昆虫细胞的大小分布,如SF9, SF21, High 5。细胞大小分析用于监测SF9感染前后的培养情况。在同一直方图上可以显示多个单元格大小的数据。

参考文献:“基于活细胞大小快速估计杆状病毒滴度的方法”,V. Janakiraman, W. F. Forrest, B. Chow, S. Seshagiri,基因泰克公司分子生物学部,基因泰克公司iostatistics部。中华流行病学杂志,132,(2006),48-58

昆虫细胞计数程序

  1. 将昆虫细胞与台盼蓝混合培养。
  2. 用移液管将20µl的混合溶液移到一次性计数室(CHT4)的进样口。
  3. 将腔体插入Auto T4仪器。
  4. 获得细胞浓度,活力和细胞大小直径。

自动成像和细胞识别Cellometer软件

SF9细胞图像

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平均电池尺寸为18.3微米。(a)原始数据图像和(b)计数的细胞用绿色圈出为活细胞,红色圈出为死细胞。

SF9细胞活力

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未感染和感染Sf9细胞的Cellometer Auto T4图像和活力分析。未感染的样本台盼蓝阳性细胞很少,因此有95%的存活率。被感染的样本有更多的台盼蓝阳性细胞,据报道有65%的存活率。

Cellometer Auto T4生成未感染Sf9细胞的细胞大小直方图

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图像细胞的细胞大小分布自动生成直方图。上面的直方图显示了未感染Sf9细胞的数量和大小。大多数未受感染的细胞直径在11到18微米之间。这些数据也可以导出到excel中进行进一步的数据分析。

Cellometer Auto T4生成杆状病毒感染Sf9细胞的细胞大小直方图

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图像细胞的细胞大小分布自动生成直方图。上面的直方图显示了被杆状病毒感染的Sf9细胞的数量和大小。大多数被感染的Sf9细胞直径在17到30微米之间。这些数据也可以导出到excel中进行进一步的数据分析。

在Cellometer Auto T4上覆盖感染和未感染Sf9细胞计数

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Cellometer T4软件可以同时绘制多个种群。在上面的直方图中,感染的细胞群与未感染的细胞群重叠,显示杆状病毒感染后细胞大小的变化。主要是电池的尺寸从平均15微米增加到平均25微米。

High Five (High 5)细胞的成像和计数

与Sf9和Sf21细胞类似,High Five细胞也被用于各种蛋白质的表达。这些松散粘附悬浮细胞系可以很容易地成像在任何Cellometer,以确定细胞浓度,活力和大小。

高5细胞

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一个明亮的高5单元格图像显示在左边,计数的单元格图像显示在右边,用绿色标出计数的单元格。

参考文献

Janakiraman V等(2006)。基于活细胞大小的杆状病毒滴度快速估计方法。中华流行病学杂志,32(1-2):48-58