胚胎体和病人衍生的器官
测量胚胎体和病人来源的器官的大小和数量
- 以各种微孔格式直接成像肿瘤球体
- 非侵入性亮场成像允许用户在多天内对同一个平板成像
- 进行双色荧光活力测定
介绍
Celigo成像细胞仪已经发展到完全自动化的活细胞肿瘤球分析。这种自动形态计量分析工具大大减少了量化3D球体的关键方面所需的时间和精力，包括尺寸、生长、随时间的生长跟踪和对化疗的响应。
旋转瓶胚状体的鉴定与计数
实验过程:
- 将1 mL培养的胚状体从250 mL的旋瓶中取出，并镀到24孔板上
- 分析了胚状体的数量和平均直径
24孔板上的胚胎体全孔图像
胚胎状体的亮场图像
数胚状体的亮场图像
| EBs的数量 | Avg直径。 | SD直径 | 最小直径 | 最大直径 | |
|---|---|---|---|---|---|
| Celigo | 643 | 187.1微米 | 63.9微米 | 82.5微米 | 514.6微米 |
| 手动计数 | 81 | 200微米 | 61.2微米 | 99.6微米 | 434.4微米 |
胚状体的面积/大小用直方图表示
- 一个门设置显示软件识别胚胎体的大小。
- 在这个例子中，红色的EBs的平均面积为11577平方微米，而绿色的胚状体的平均面积为38196平方微米。
- 这种分布还表明，大多数胚状体分布在10 - 50k平方微米范围内，只有极少数非常大的100k或更大的胚状体。
Celigo软件还可以绘制出胚状体的等效直径
- 在这个例子中，门的尺寸被设置为120微米。因此，所有用红色圈起来的EBs的直径都小于120微米(即181ebs)。
- 所有用蓝色圈起来的EBs都大于120微米，共有462个
实验二程序:胚状体的鉴定和计数
- 采集并分析了6孔板的全井图像。
- 下面是形成胚状体的原始和分析图像。
- 绿色轮廓表示已计数的干细胞聚集。
6孔板上的胚胎体全孔图像
胚胎状体的亮场图像
数胚状体的亮场图像
尺寸控制
| EBs | 数量 | 最小值大小(µM) | 最大大小(µM) | Avg大小(µM) | 方差 |
|---|---|---|---|---|---|
| 全部的 | 3362 | 51.9 | 517.8 | 96.5 | 40．8 |
| 小 | 1181 | 51.9 | 75.1 | 63.9 | 6．7 |
| 媒介 | 1863 | 75.0 | 149.0 | 100.47 | 19 |
| 大 | 323 | 149.3 | 517.8 | 191.9 | 44.8 |
表1
生成患者源性器官(PDOs)的细胞来源
1分离成体干细胞/祖细胞
2.HESC / iPSC分化
3.从相应器官中分离出的组织碎片。(例如肠隐窝或肝胰管)
在24孔板上镀金和成像小鼠胰腺器官
- PDO产生于6000个小鼠胰腺细胞，在Matrigel®中播种，并在播种后3天成像。
- 利用Celigo软件采集全井亮场图像，自动确定各器官的大小。
- 绿色填充伪色是用来容易识别Celigo计数的PDOs。
在96孔板上镀金和成像小鼠胰腺器官
- PDO产生于2000个小鼠胰腺细胞，在Matrigel®中播种，并在播种后3天成像。
- 利用Celigo软件采集全井亮场图像，自动确定各器官的大小。
- 绿色填充伪色是用来容易识别Celigo计数的PDOs。
在96孔板上镀rfp标记的小鼠胰腺类器官并成像
- PDO产生于2000个小鼠胰腺细胞，在Matrigel®中播种，并在播种后3天成像。
- 利用Celigo软件采集全井亮场图像，自动确定各器官的大小。插图显示了一幅放大的亮场图像。
- 采用Celigo软件生成全井RFP和亮场叠加图像。
小鼠胰腺类器官在384孔板中电镀和成像
- PDO是由500个小鼠胰腺细胞在Matrigel®中播种产生的，并在播种后3天成像。
- 利用Celigo软件采集全井亮场图像，自动确定各器官的大小。
- 绿色填充伪色是用来容易识别Celigo计数的PDOs。