胚胎体和病人衍生的器官

测量胚胎体和病人来源的器官的大小和数量

  1. 以各种微孔格式直接成像肿瘤球体
  2. 非侵入性亮场成像允许用户在多天内对同一个平板成像
  3. 进行双色荧光活力测定
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介绍

Celigo成像细胞仪已经发展到完全自动化的活细胞肿瘤球分析。这种自动形态计量分析工具大大减少了量化3D球体的关键方面所需的时间和精力,包括尺寸、生长、随时间的生长跟踪和对化疗的响应。

肿瘤球的自动成像和分析

旋转瓶胚状体的鉴定与计数

实验过程:

  • 将1 mL培养的胚状体从250 mL的旋瓶中取出,并镀到24孔板上
  • 分析了胚状体的数量和平均直径

24孔板上的胚胎体全孔图像

胚状体全像

胚胎状体的亮场图像

亮场成像胚状体

数胚状体的亮场图像

计算拟胚体
EBs的数量 Avg直径。 SD直径 最小直径 最大直径
Celigo 643 187.1微米 63.9微米 82.5微米 514.6微米
手动计数 81 200微米 61.2微米 99.6微米 434.4微米

胚状体的面积/大小用直方图表示

胚状体的Celigo面积大小直方图
  • 一个门设置显示软件识别胚胎体的大小。
  • 在这个例子中,红色的EBs的平均面积为11577平方微米,而绿色的胚状体的平均面积为38196平方微米。
  • 这种分布还表明,大多数胚状体分布在10 - 50k平方微米范围内,只有极少数非常大的100k或更大的胚状体。

Celigo软件还可以绘制出胚状体的等效直径

Celigo图等直径的胚状体
  • 在这个例子中,门的尺寸被设置为120微米。因此,所有用红色圈起来的EBs的直径都小于120微米(即181ebs)。
  • 所有用蓝色圈起来的EBs都大于120微米,共有462个

实验二程序:胚状体的鉴定和计数

  • 采集并分析了6孔板的全井图像。
  • 下面是形成胚状体的原始和分析图像。
  • 绿色轮廓表示已计数的干细胞聚集。

6孔板上的胚胎体全孔图像

6孔板上EBs的全孔图像

胚胎状体的亮场图像

胚胎状体的亮场图像

数胚状体的亮场图像

计数EBs的亮场图像

尺寸控制

直方图:表示胚状体的大小
EBs 数量 最小值大小(µM) 最大大小(µM) Avg大小(µM) 方差
全部的 3362 51.9 517.8 96.5 40.8
1181 51.9 75.1 63.9 6.7
媒介 1863 75.0 149.0 100.47 19
323 149.3 517.8 191.9 44.8

表1

生成患者源性器官(PDOs)的细胞来源

1分离成体干细胞/祖细胞

分离成体干细胞/祖细胞

2.HESC / iPSC分化

HESC / iPSC分化

3.从相应器官中分离出的组织碎片。(例如肠隐窝或肝胰管)

分离的组织碎片

在24孔板上镀金和成像小鼠胰腺器官

在24孔板上镀金和成像小鼠胰腺器官
  • PDO产生于6000个小鼠胰腺细胞,在Matrigel®中播种,并在播种后3天成像。
  • 利用Celigo软件采集全井亮场图像,自动确定各器官的大小。
  • 绿色填充伪色是用来容易识别Celigo计数的PDOs。

在96孔板上镀金和成像小鼠胰腺器官

在96孔板上镀金和成像小鼠胰腺器官
  • PDO产生于2000个小鼠胰腺细胞,在Matrigel®中播种,并在播种后3天成像。
  • 利用Celigo软件采集全井亮场图像,自动确定各器官的大小。
  • 绿色填充伪色是用来容易识别Celigo计数的PDOs。

在96孔板上镀rfp标记的小鼠胰腺类器官并成像

  • PDO产生于2000个小鼠胰腺细胞,在Matrigel®中播种,并在播种后3天成像。
  • 利用Celigo软件采集全井亮场图像,自动确定各器官的大小。插图显示了一幅放大的亮场图像。
  • 采用Celigo软件生成全井RFP和亮场叠加图像。

小鼠胰腺类器官在384孔板中电镀和成像

  • PDO是由500个小鼠胰腺细胞在Matrigel®中播种产生的,并在播种后3天成像。
  • 利用Celigo软件采集全井亮场图像,自动确定各器官的大小。
  • 绿色填充伪色是用来容易识别Celigo计数的PDOs。