细胞周期分析

Celigo用于细胞周期分析的好处

  1. 使用单个平台执行不同的细胞周期实验
  2. 分析细胞周期数据使用内置的门控界面
  3. 不需要胰酶贴壁细胞进行细胞周期试验
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介绍

细胞周期分析通常用于筛选影响细胞生长和增殖的化合物。Celigo细胞成像仪允许用户使用通常为流式细胞术开发的检测方法对贴壁细胞进行细胞周期分析。Celigo软件的灵活门控界面用于识别和量化细胞周期各阶段的细胞种群。这种分析可以使用单一的染料,如DAPI,或使用DNA合成的第二标记,如BrdU染色。它有可能与有丝分裂的标记物如组蛋白H3磷酸化多路复用。

细胞周期π

协议

  1. 种子A375细胞置于96孔培养皿中
  2. 用选定的药物或药物控制治疗
  3. 用100%甲醇冰镇15分钟
  4. 用细胞周期PI试剂染色40分钟
  5. 在大约15分钟内成像整个96孔板(全孔成像)
  6. 使用Celigo门控界面分析细胞周期数据~ 20分钟

结果:采用staurosporine处理的A375细胞进行细胞周期测定

控制——直方图

控制——直方图

计数不同细胞周期的PI+细胞

计数不同细胞周期的PI+细胞

结果

结果

Staurosporine-Treated——直方图

Staurosporine-Treated——直方图

计数不同细胞周期的PI+细胞

计数不同细胞周期的PI+细胞

结果

结果

细胞周期EdU/DAPI

协议

  1. 在96孔培养皿中播种A549细胞
  2. 用选定的药物或药物控制治疗
  3. 添加媒体与EdU每井
  4. 用100%甲醇冰镇15分钟
  5. 与DAPI染色
  6. 在大约15分钟内成像整个96孔板(全孔成像)
  7. 使用Celigo门控界面分析细胞周期数据~ 20分钟

结果:采用staurosporine处理的A375细胞进行细胞周期测定

控制-散点图

控制-散点图

EdU和DAPI染色不同细胞周期的细胞

EdU和DAPI染色不同细胞周期的细胞

结果

结果

处理-散点图

处理-散点图

EdU和DAPI染色不同细胞周期的细胞

EdU和DAPI染色不同细胞周期的细胞

结果

结果

细胞周期BrdU / DAPI

协议

  1. 在96孔板上播种8000-10000个细胞/孔,最终体积为100 μl/孔。
  2. 在5% CO2, 37°C下孵育细胞过夜。
  3. 药物化合物治疗
  4. BrdU合并
  5. 固定和DNA变性
  6. 抗体标记检测BrdU
  7. DAPI核染色
  8. 在大约15分钟内成像整个96孔板(全孔成像)
  9. 使用Celigo门控界面分析细胞周期数据~ 20分钟

典型图像和核识别应如下所示:

DAPI细胞图像

DAPI细胞图像

BrdU细胞图像

BrdU细胞图像

DAPI和BrdU细胞图像

DAPI和BrdU细胞图像

DAPI面具分割

DAPI面具分割

BrdU面具分割

BrdU面具分割

DAPI和BrdU掩码分割

DAPI和BrdU掩码分割

步骤1。按如下方式放置3个栅格,图像上的单元格将以颜色标识:

BrdU:综合强度vs DAPI综合强度
color-identified细胞

步骤2。按照下面的方法将每个门控细胞种群分配到正确的类中。门的颜色将匹配细胞的种群和图像上的分割轮廓的颜色。

门控应用Celigo彩色编码cf欧洲杯竞猜
Celigo彩色编码的门控应用2cf欧洲杯竞猜
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步骤3。选择分析井,“开始分析”

步骤4。数据是根据G0/G1、S-和G2/M细胞类的板图进行组织的。

Celigo板块地图数据

蚜虫素对细胞周期的影响

蚜虫素对细胞周期的影响