表面蛋白质和抗体

免疫染色蛋白质分析

细胞间粘附分子(ICAM-1)是通常在上皮细胞上低水平表达的表面糖蛋白。它也用IL1和TNF-α活化刺激以表达免疫细胞。此外,它是人鼻病毒(常见冷病毒)的呼吸上皮细胞上的结合位点。已知ICAM-1用于稳定细胞 - 细胞相互作用和白细胞内皮迁移。

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传统上,通过通过荧光显微镜检查或通过流式细胞术定量,定性地进行荧光标记的ICAM-1的活细胞分析。但是,手动显微镜方法是耗时和非定量的。流式细胞术可以产生高度敏感的定量结果,但需要高度训练的用户来产生有意义的结果。

通过使用CeliGo成像细胞仪,可以成像抗体或荧光蛋白标记的受体,测量靶细胞群的荧光强度以自动测定CD54 ICAM-1表达的水平。

eutocyte和ICAM-1

Celigo成像细胞术

Celigo经营

Celigo经营
  1. Celigo在微孔板上的全部井
  2. 分析捕获的图像
  3. 每个分析的样本都会自动输出结果

实验方法

  1. 靶细胞(THP-1)在24孔板(GRENER 662160)中以2×10 4个细胞/孔接种
  2. 用不同的LPS浓度刺激细胞
  3. 然后用CD54-PE和同种型对照染色细胞
  4. 染色后,用Celigo扫描板并分析以测量细胞上的CD54表达水平

CD54 ICAM-1荧光图像的活细胞分析

CD54 ICAM-1染色

CD54 ICAM-1染色表面蛋白

CD54-PE荧光图像显示,随着LPS浓度降低,细胞上的ICAM-1表达的百分比降低。

使用Celigo捕获的明亮场图像计算单元的总数,而荧光图像被计数以确定表达CD54 ICAM-1的小区数。

CD54表达水平由每个测试样品中的总荧光强度确定。

使用Celigo成像细胞测量CD54表达水平的定量

CD54 eExpression的定量

CD54 eExpression的定量

用ICAM-1 CD54AB染色的细胞显示出荧光强度降低,因为LPS浓度降低。

用0 ug / ml LPS和同种型控制的对照均显示出荧光信号

结论

Celigo成像细胞仪可用于通过荧光检测测量ICAM-1 CD54表达。

捕获多孔微孔板中的明场和荧光图像的能力自动允许基于高通量的细胞的测定。

此外,直接在板上分析粘附细胞消除了对胰蛋白酶化的需求并消除对细胞的破坏。

转铁蛋白的受体检测测定

血液中的转铁蛋白是糖蛋白,其可以将铁从肝脏和肠道运送到细胞中。通常,细胞上的表面转移素受体可以在中性pH下容易地结合到中性pH下的铁ransferrin(转铁蛋白),然后诱导诱导铁烷烃的受体介导的内吞作用。将铁(Fe3 +)离子在细胞内通过克拉林涂覆的囊泡溶到内体,而未结合形式的肺转介素被分泌回到血液中以重新装载铁。该途径是药物,蛋白质和治疗基因到具有过表达转移素受体的恶性细胞中的吸毒者,蛋白质和治疗基因的吸引方法。

传统上,通过荧光显微镜或通过流式细胞术定量测量,可以定性检查荧光标记的转移素受体。然而,手动显微镜方法是耗时的,并且非定量和流式细胞术可以产生敏感的定量结果,而是需要高度训练的专用用户。

通过使用Celigo成像细胞仪,可以成像抗体或荧光蛋白标记的受体,测量靶细胞群的荧光强度以自动测定CD71转移素受体表达的水平。

转铁蛋白的受体检测测定

Celigo成像细胞术

Celigo经营

Celigo经营
  1. Celigo在微孔板上的全部井
  2. 分析捕获的图像
  3. 每个分析的样本都会自动输出结果

实验方法

  1. 靶细胞(H376)接种在2×104.24孔板中的细胞/孔(Greiner 662160)
  2. 用CD71-PE,同种型对照,非特异性AB和非特异性AB同种型标记细胞
  3. 染色后,用Celigo扫描板并分析以测量细胞上的CD71表达水平

CD71转铁蛋白受体明亮场和荧光图像的活细胞分析

CD71转铁蛋白受体的表达

CD71转铁蛋白受体的表达

与同种型对照相比,CD71-PE荧光图像显示出在细胞上的高%转铁蛋白受体表达。

使用Celigo捕获的明场图像计算单元的总数,而荧光图像被计数以确定表达CD71转移素受体的细胞的数量。

CD71表达水平由每个测试样品中的总荧光强度决定

使用Celigo成像细胞仪进行CD71表达水平的定量

CD71表达量化

CD71表达量化

用特异性转化素受体AB染色的细胞显示出与单型对照,非特异性AB和非特异性AB的同种型对照相比的总荧光强度信号。

结论

Celigo成像细胞仪可用于通过荧光检测测量转铁蛋白受体表达。

捕获多孔微孔板中的明场和荧光图像的能力自动允许基于高通量的细胞的测定。

此外,直接在板上分析粘附细胞消除了对胰蛋白酶化的需求并消除对细胞的破坏。