伤口愈合

通过监测和量化指定区域内的细胞生长,执行伤口愈合迁移试验

  1. 测量迁移到排除(划痕)区域的细胞的汇合和细胞计数
  2. 获取同一钢板的多个图像,以产生伤口愈合的动态读数
  3. 使用亮场和/或荧光成像进行伤口愈合试验
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Celigo在96孔鸭嘴兽伤口愈合中的应用™ 盘子

移除井塞会留下一个隔离区,使细胞迁移到其中。

Celigo通过亮场或荧光检测细胞迁移到排斥区。

协议

  1. 种子细胞过夜
  2. 从Oris上拆下井塞™ 板(或者,进行手动刮伤)
  3. 使用Celigo绿色通道(暗淡或明亮GFP细胞的不同曝光时间)对孔进行成像
    1. 取下塞子后0小时、19小时、24小时、43小时和71小时取板
  4. 分析
    1. 伤口愈合应用程序设置为36%的孔掩膜减少,以确定分析区域
    2. 采集和分析参数已保存,以便在所有时间点重复使用

平板图:电池类型和条件

平板图:电池类型和条件

图例:NC-阴性对照,KD-击倒

用口鸭嘴兽检测绿色荧光蛋白标记细胞的迁移™ 96孔板

采集全井图像,并通过Celigo软件定义分析区域。

Celigo伤口愈合应用程序报告定义的分析区域内每个井的伤口愈合合流和细胞计数。

全井荧光图像

全井荧光图像

平板细胞。取下塞子,在荧光中成像整个井

分析区域的定义

分析区域的定义

分析区域通过减小井眼遮罩尺寸(占总井眼面积的36%)来定义。

分析区域(缩放)

分析区域(缩放)

Celigo测量并报告分析区域内的汇流和细胞计数。

绿色荧光蛋白标记的H1299细胞的伤口愈合定量研究

Celigo为H1299-GFP细胞在孔和板水平生成生长曲线

Celigo为H1299-GFP细胞在孔和板水平生成生长曲线

伤口愈合增加%=伤口愈合%(71小时)-伤口愈合%(0小时)

试验了两种播种密度:70%和85%。这些播种密度是指用于播种到Oris板上的原始板的汇合处。

数据表明,70%和85%的融合样本的伤口愈合趋势相似。

在下表中,与研究中的其他细胞类型相比,A549细胞似乎迁移到伤口中的次数最少。

平均伤口愈合率增加
亮场与荧光分析伤口愈合融合的比较

亮场与荧光分析伤口愈合融合的比较

亮场分析

亮场分析

亮场H1299-GFP(85%)

亮场H1299-GFP(85%)
Celigo为H1299-GFP细胞在孔和板水平生成生长曲线

Celigo为H1299-GFP细胞在孔和板水平生成生长曲线

荧光分析

荧光分析

荧光H1299-GFP(85%)

荧光H1299-GFP(85%)