抗体依赖性细胞介导的细胞毒性

使用中性粒细胞、NK细胞和CIK细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性

  1. 进行无毒、无放射性ADCC分析
  2. 使用不同的免疫细胞进行ADCC分析
  3. 为ADCC测定产生动力学数据
  4. 通过在分析期间对同一平板进行成像,优化分析开发
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ADCC无毒钙黄绿素AM释放试验

作为适应性免疫系统的一部分,抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)是免疫系统防御的关键机制。通常,入侵的病原体或癌细胞由特异性治疗性抗体识别,随后由识别并结合治疗性抗体的免疫细胞杀死。传统上,细胞毒性试验(如ADCC)是使用下文所述的各种释放试验进行的。

检测方法 描述 存在的问题
放射性释放 测量释放或放射性标记,51Cr,101.上清液中 处理危险品;细胞死亡的间接测量
荧光释放 测量上清液中钙黄绿素AM荧光分子的释放 细胞死亡的间接测量;仅限终点分析
乳酸脱氢酶释放 测量上清液中胞浆酶的释放 细胞死亡的间接测量;仅限终点分析
荧光素酶报告试验 当细胞死亡时测量荧光素酶 间接测量细胞死亡
流式细胞术 测量样品中可活细胞和活力的数量 不能在盘子里表演;贴壁细胞必须胰蛋白酶化
Celigo活的和死的靶肿瘤细胞

通过用无毒、无放射性的钙黄绿素AM标记靶肿瘤细胞,我们可以通过钙黄绿素AM释放试验监测免疫效应细胞对肿瘤细胞的杀伤。

Celigo图像细胞仪获取全孔图像并报告活钙黄绿素阳性细胞的数量。通过在一段时间内对同一个平板进行成像,或通过不同的E:T比率,我们可以直观和定量地检查靶肿瘤细胞的动态杀伤过程。

用钙黄绿素AM染色靶细胞直接计数抗体依赖性中性粒细胞介导的细胞毒性

Celigo实验方案

  • 收集靶细胞(粘附或悬浮)并用钙黄绿素AM染色
  • 靶细胞在微孔板的孔中接种
  • 抗体以不同浓度添加到孔中
  • 效应细胞以不同的E:T比率添加到孔中
  • 使用Celigo扫描和分析微孔,以直接计数钙黄绿素AM染色的靶细胞
  • 生成时间进程%细胞毒性数据,通过减少靶细胞显示ADCC

时间依赖性中性粒细胞ADCC图像

[时间]

时间依赖性中性粒细胞ADCC图像

随着时间的推移,Calcein AM染色靶细胞的数量减少。

在对照抗体中,中性粒细胞没有诱导细胞毒性。

在亮场/荧光叠加图像中可以清楚地看到,中性粒细胞包围着靶细胞并诱导细胞毒性。

中性粒细胞ADCC介质依赖性剂量反应结果

中性粒细胞ADCC时间依赖性剂量反应

随着时间的延长,阳性抗体的靶细胞毒性增加,而对照组没有显示出明显的变化。剂量反应显示阳性抗体样品诱导靶细胞产生高中性粒细胞介导的ADCC效应

用钙黄绿素-AM染色靶细胞直接计数抗体依赖性NK介导的细胞毒性

时间

NK ADCC时间依赖性剂量反应结果

NK ADCC时间依赖性剂量反应结果

在时间依赖图中,随着时间的推移,不同抗体浓度显示出不同水平的细胞毒性%。在剂量依赖图中,随着抗体浓度的增加,剂量反应也显示出不同程度的细胞毒性%。

抗体依赖性CIK介导的细胞毒性使用Calcein AM染色靶细胞的直接细胞计数

抗体浓度

对应门控的靶细胞图像

视觉上,随着抗体浓度的降低,死亡靶细胞(黄色)的数量减少。

CIK ADCC剂量依赖性细胞毒性结果

CIK ADCC剂量依赖性细胞毒性结果

在终点,相对于抗体浓度,显示出明显的细胞毒性剂量反应。

细胞毒性百分比由下式计算。

细胞毒性百分比方程

随着抗体浓度的增加,细胞毒性也增加。