嵌合抗原受体(CAR) t细胞介导的细胞毒性
检测嵌合抗原受体(CAR) t细胞介导的细胞毒性
- 对CAR-T细胞杀死靶细胞进行图像和绘图
- 提供测量细胞毒性百分比的数据
- 捕捉显示CAR-T细胞杀死目标细胞的BF和FL图像
用示踪剂和活性染料测定CAR - t介导的细胞毒性
嵌合抗原受体(CAR-T)疗法的重点是产生一种可以直接结合并攻击癌细胞的转基因人类t细胞。CAR-T细胞由肿瘤特异性抗原结合区域组成，该区域与基因工程激活基元融合。一旦在细胞表面表达，t细胞就可以靶向并攻击癌症特异性细胞。
通过在靶肿瘤细胞上标记无毒、非放射性的钙黄素AM，我们可以监测CAR-T细胞对肿瘤细胞的杀伤。活的目标癌细胞将被绿色钙黄素AM标记，而死亡细胞无法保留绿色染料，因此将其释放到周围的介质中。或者，靶肿瘤细胞可以在实验开始时用膜结合的CFSE染色，然后用PI反染色。这种染色策略允许检测死亡(CFSE pos+PI+)靶细胞和死亡(CFSE neg+PI+) CAR-T细胞。
CAR - T介导的细胞毒性的成像和定量
Celigo实验协议
- 收集靶细胞(贴壁或悬液)，用示踪染料CFSE染色
- 靶细胞接种于微孔板孔中
- CAR - T细胞以不同的E:T比率加入孔中
- 在终点，加入活性染料(PI)来测定靶细胞的活性
- 在终点使用Celigo对井进行扫描和分析，以测量靶细胞计数和活力
- 产生终点细胞毒性百分比数据以显示靶细胞的细胞毒性
计算细胞毒性百分率
细胞毒性%由下式计算。
目标和效应器细胞荧光和亮场叠加图像
艾凡:T比
在与CAR-T细胞混合之前，用CFSE标记肿瘤细胞。红色/绿色合并图像中的黄色细胞代表死亡的目标肿瘤细胞。碘化丙啶阳性的细胞是死的CAR-T细胞。活的靶肿瘤细胞是绿色的。
荧光强度门控细胞毒性百分率
艾凡:T比
随着E:T比值的增加，靶细胞死亡的数量增加，这在散点图中可见。门控允许测量活的和死的目标细胞的数量来计算最终的细胞毒性百分比。
CAR-T E:T比值依赖的细胞毒性结果
在终点，我们观察到E:T比值依赖于测定的细胞毒性百分比的增加。