补体依赖细胞毒性

进行补体依赖性细胞毒性试验

  1. 监测补体依赖性细胞毒性的能力
  2. 捕捉染色靶细胞在补体杀死前后的图像
  3. 提供直接的细胞计数来测量细胞毒性百分比
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钙黄素AM释放法测定补体依赖性细胞毒性

为了激活补体级联,循环的补体蛋白C1q必须首先被肿瘤细胞表面的结合免疫球蛋白招募到细胞表面。补体级联的启动导致下游形成膜攻击复合物。膜攻击复合物在细胞表面形成小孔,从而渗透细胞膜,导致细胞死亡。

基于抗体的癌症治疗

(改编自)保罗·卡特。(2001)提高以抗体为基础的癌症治疗的疗效。《自然评论癌症》1:11 118-129

通过用胞浆染料钙黄素AM对靶肿瘤细胞进行染色,我们可以通过检测钙黄素AM在细胞内的存留来监测细胞死亡。只有细胞膜完整的活肿瘤细胞才能保留绿色染料,而死细胞则会将钙黄素释放到周围的培养基中。基于染料的保留,Celigo软件可以随着时间的推移枚举活靶肿瘤细胞的数量。

利用钙黄素AM染色靶细胞的直接细胞计数测量CDC

Celigo实验协议

  • 收集靶细胞(贴壁或悬液),用钙黄素AM染色
  • 靶细胞接种于微孔板孔中
  • 对井进行了补充
  • 抗体以不同的浓度加入到孔中
  • 用Celigo直接计数钙黄素AM染色的靶细胞扫描分析
  • 通过观察靶细胞数量随时间的减少,我们可以确定补体依赖性细胞毒性试验的细胞毒性百分比。

美国疾病控制与预防中心图像存在剂量依赖的相关性

美国疾病控制与预防中心图像存在剂量依赖的相关性

随着时间和抗体浓度的增加,钙黄素AM染色靶细胞的数量减少

低[抗体],细胞毒性较低

高[抗体],高细胞毒性显示,几乎100%的细胞失去钙黄素AM荧光

CDC时间依赖性剂量反应结果

CDC时间依赖性剂量反应结果