IPSC殖民地计数

IPSC重新编程介绍

在这里,我们为Celigo图像细胞仪提供了一种活细胞分析方法,以将显微镜成像和流式细胞术群体分析中的优点结合在基于板的动力学测定中,用于IPSC重新编程的研究。

  • 遵循IPSC随时间重新编程,没有胰蛋白酶
  • 图像,记录和检测6孔板的整个井中的所有殖民地
  • 更快的测定(7分钟读取6孔板)
  • 与FC分析相比,IPSC和饲养细胞死亡的高增殖率不会影响结果

使用含有Morange Oksm和GFP Nanog的转基因MEF细胞系我们能够通过检测橙色菌落的产生和绿色菌落的随后演变来跟踪IPSC菌落的演变。

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IPSC重新编程的显微镜分析的缺点

  • 只能在整个重新编程中遵循少数殖民地
  • 选择遵循重编程过程的殖民地可能不是理想的例子
  • 找出相同的焦平面并不总是可能的
  • 需要在单独的图像处理软件包上导出和分析图像

IPSC重编程流动细胞仪分析的缺点

  • 必须胰蛋白质化干细胞菌落成单细胞悬浮液
  • 细胞群体分析不会反映大小和组成变化的菌落
  • 由于胰蛋白酶化和操纵,来自MEF细胞和死细胞的干扰
  • 破坏性并且需要每个时间点的新样本

IPSC重编程实验的实时细胞分析1

IPSC重新编程实验

计数Morange +殖民地,Nanog GFP和绿色和红色叠加图像

  1. 板块在5×104.转基因鼠胚胎成纤维细胞(TMEF)和1×105.野生型(WTMEF)在6孔明胶涂层的肋骨板上(猫#3516)。
  2. 山崎因子的十二胞菌环诱导产生生理殖民地,并在预编程进展后,菌落开始表达纳米GFP。每两天补充培养基,含有大西环素,以继续重新编程。Nanog GFP通常出现在D8,因此当成像和殖民币计数开始时。
  3. 为了监测重新编程的进展,扫描板并分析每两天从D2-D14中评分总菌落和绿色菌落。
爱丁堡大学MRC监察医学MRC Lab的数据提供了kaji实验室。
IPSC重新编程水平
重新编程 殖民地# 橙色殖民地# 绿色殖民地的数量 %重新编程
低的 200. 200. 50. 25.
高的 700. 700. 600 86.

IPSC重编程实验的实时细胞分析2

IPSC重新编程分析中的当前实践

显微镜和流式细胞术分析的组合用于分析IPSC重编程。显微镜用于可视化重编程。在整个过程中选择一个或两个代表性菌落。使用标记笔来鉴定这些菌落以识别。然后使用胰蛋白酶蛋白化的流式细胞术检查IPSC抗原表达。

6孔板的全部井图像

ipsc-shrna从6孔板的全孔图像

监测纳米+菌落的形成和数量

监测纳米+菌落的形成和数量

Celigo测定允许研究人员调查重编程过程中的其他因素。在该实施例中,添加因子X的ShRNA增强了表达纳米菌落的产生。根据此数据,我们可以总结因子X在Oksm的上游和Nanog下游的作用,并且可能在IPSC重新编程中发挥关键作用。

监测人体成纤维细胞随时间重编程实验

殖民地形成后转导

殖民地形成后转导

人成纤维细胞的全井成像在12孔板中监测的重编程实验,在转导后10,20和30天使用Celigo。

在Celigo上的HESC图像获取

在Celigo上的HESC图像获取

全阱(12孔板;左)和缩放图像(右)的HESC。图片由南福德 - 伯纳姆医学研究所的B. Nelson,N.Kan,M. Mercola。

干细胞多能性的活细胞分析

干细胞表征

可以使用Celigo细胞成像细胞仪快速扫描和评估以任何标准孔板格式生长的干细胞培养物,大大减少了表征这些复杂培养所需的时间和精力。迅速获得全孔亮场和/或荧光图像,以允许分析干细胞培养,分化状态和分裂时间/比率。Celigo cytometer还可用于评估干细胞相关蛋白的表达。通过相同的板的重复成像可以随时间观察培养物,以监测重编程和分化事件的进展。

表面标志物活细胞染色

表面标志物活细胞染色

Celigo成像细胞仪干细胞培养分析优势

  • 干细胞培养物的快速,全井成像(96-孔至6孔;在〜10分钟内扫描整个6孔板)
  • 在明亮的场上获取和缝合的图像加上最多4个荧光通道
  • 跟踪活干细胞培养物分析差异化状态
  • 使用活固定干细胞染色模式分析
  • 通过传统显微镜消除繁琐的收集和分析图像

Celigo细胞成像细胞仪的干细胞表征

Celigo细胞成像细胞仪的干细胞表征

全阱(6孔板;左)和髋关节的缩放图像(中,右侧),具有特征干细胞标记物染色。