伤口愈合的活细胞分析

通过监测和定量确定区域的细胞生长来执行伤口愈合迁移测定

  1. 测量迁移到排除(划痕)区域的细胞的汇合和细胞计数
  2. 获取同一板块的多个图像以产生伤口愈合的动力学读数
  3. 使用明亮场和/或荧光成像进行伤口愈合测定
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伤口愈合测定的成像和定量

伤口愈合测定的成像和定量

在伤口愈合迁移测定中,通过机械工具或通过抑制细胞生长在限定区域中的装置在完全汇集的细胞层上产生伤口。Celigo用于在多个时间点与伤口相像整个孔。对每个孔自动计算汇合。汇合的增加直接测量细胞迁移。

Celigo伤口愈合应用程序使用96孔Platypus Oris™板

删除井止动件将禁止区留到单元格迁移的位置。

Celigo检测在明亮场或荧光中迁移到禁区的细胞。

伤口愈合应用协议

  1. 播种细胞过夜
  2. 从Orias™板上取下井塞(或者,执行手动划痕)
  3. 使用Celigo Green Channel(昏暗或明亮GFP细胞的各种曝光时间)进行井进行成像
    1. 在塞子拆除后,获得:0h,19h,24h,43h和71h
  4. 分析
    1. 伤口愈合申请设置了36%的井面膜减少,以定义分析区域
    2. 采集和分析参数保存以重复使用所有时间点

板材地图:细胞类型和条件

伤口愈合板图

传奇:NC - 负控制,KD - 敲低

使用Platypus Oris™96孔板测量GFP标记的细胞的迁移

获取全阱图像,分析区域由Celigo软件定义。

Celigo伤口愈合申请报告了在定义的分析区域内的每个孔的伤口愈合汇合和细胞计数。

整个荧光图像

GFP标记细胞的全部井图像迁移

板细胞。在荧光中删除塞子和图像。

分析区域的定义

分析区域的迁移定义

分析区域是通过减少井面罩尺寸(占总井面积的36%)来定义。

分析区域(放大)

迁移分析区域

Celigo测量并报告分析区域内的汇合和细胞计数。

GFP标记的H1299细胞的伤口愈合量化

GFP标记的H1299细胞的伤口愈合量化

Celigo在H1299-GFP细胞的井和板材水平产生生长曲线

增加伤口愈合%=伤口愈合%(71h) - 伤口愈合%(0H)

测试了两种播种密度:70%和85%。这些播种密度指原始板的汇合用于播种到奥里斯板上。

数据表明,对于70和85%的汇合样品,可以看到类似的伤口愈合趋势。

在下表中,与研究中的其他细胞类型相比,A549细胞似乎已经迁移到卷中中。

平均增加伤口愈合百分比图1

Celigo活细胞分析伤口愈合成像和定量使用明田分析

全井明场图像

伤口愈合的全井成像

板细胞。在明亮的场地中删除塞子和图像全部井。

分析区域的定义

伤口愈合整个井图像显示井面膜

分析区域是通过减少井面罩尺寸(占总井面积的36%)来定义。

分析区域(放大)

伤口愈合汇合图像

Celigo测量并报告分析区域内的汇合和细胞计数。

细胞类型和电镀密度

细胞类型和电镀密度

Celigo伤口愈合申请通过明亮的场成像报告了每个孔的伤口愈合汇合和细胞计数,而不需要染料染色或GFP转染。

U87和HepG2细胞在初始汇合测量的70和85%时是平板。

使用Platypus Oris™96孔板测量标记的HepG2细胞的迁移

塞子拆卸后0小时

在0HRS时迁移标记的HEPG2细胞

塞子拆卸后24小时

在24小时迁移标记的HepG2细胞

塞子拆卸后43小时

在43小时内迁移标记的HepG2细胞

停止后71小时移除后

在71小时内迁移标记的HepG2细胞

顶行图像显示了填充的全阱明亮的场地图像。底行显示分割的缩放视图。

使用明场分析标记H1299细胞伤口愈合定量

标记H1299细胞的伤口愈合定量
标记H1299细胞数据图的伤口愈合量化

伤口愈合增加的活细胞分析%=伤口愈合%(71h) - 伤口愈合%(0H)

测试了两种播种密度70%和85%。这些播种密度指原始板的汇合用于播种到奥里斯板上。

数据表明,对于70和85%的汇合样品,观察到U87和HepG2细胞之间的类似伤口愈合趋势。

标记H1299细胞百分比数据的伤口愈合量化

亮场与荧光分析伤口愈合汇合的比较

明亮的田间分析

伤口愈合汇合明亮的场地图像

亮田H1299-GFP(85%)

伤口愈合汇合井级明场数据
明亮场荧光比较数据伤口愈合

荧光分析

伤口愈合汇合荧光

荧光H1299-GFP(85%)

伤口愈合汇合荧光井级数据

亮场与荧光分析之间的伤口愈合汇合在两种分析方法之间没有显着差异。

伤口愈合测定在24孔板中使用Schwann和Huvec细胞

协议

  1. 将cyto-select插入物放入井中
  2. 板材大量细胞,使汇合达到夜间
  3. 删除插入(理想时间0)
  4. 读板
  5. 将增长或条件介质添加到井中
  6. 读板0,4,8,24,31小时
伤口愈合使用Schwann和Huvec

Zoom View的Schwann Cell伤口“关闭”在31小时内

0个小时

该图示出了截取图像0,4,8,24和31小时的井中所示的孔区域。

4个小时

Schwann细胞伤口在4小时内闭合

8小时

Schwann细胞伤口在8小时内关闭

24小时

Schwann细胞伤口在24小时内闭合

31小时

Schwann细胞伤口在31小时内关闭

Celigo伤口愈合申请报告了每个孔的伤口愈合汇合和细胞计数。