量化病毒抗体中和

使用Celigo图像细胞仪使用96孔微孔板中的直接细胞计数抗体中和

  1. 高通量自动化成像和直接在板中的分析
  2. 直接计数在没有胰蛋白酶的板中的受感染细胞
  3. 在8分钟内测量抗体中和效果
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测量抗体中和引入

抗体中和测定使用抗体或直接用血清来防止病毒的感染性。通常,宿主细胞用不同的中和抗体或血清的不同滴定处理。接下来,使病毒在不同的感染性下感染宿主细胞。最后,分析每个滴定以确定感染性并量化抗体或血清的中和能力。

协议

  1. 首先,将病毒颗粒(RVP)与人血清的不同滴定孵育1小时,在37℃下
  2. 然后将Raji细胞用抗体-RVP复合物感染并在96孔微孔板中接种
  3. 然后将板在37℃温育48小时
  4. 孵育后,使用Celigo图像cytometer成像并分析(8分钟/ 96孔板),以计算GFP阳性感染细胞的数量
  5. 结果被绘制为血清滴定的剂量响应,并且使用GraphPad Prism计算IC 50值

使用96孔板中计数的直接细胞测量Zika病毒对不同抗体的抗体中和

  1. Raji细胞和6种不同的抗体-RVP复合物(Zika病毒)在上述方案后96孔微孔板中感染和接种
  2. 48小时后,Celigo图像细胞仪用于计数每个孔中的GFP阳性感染细胞的数量,以产生所有测试的抗体-RVP复合物的剂量响应曲线
  3. 下面显示了两组抗体-RVP络合物处理的示例图像,其中可以在不同抗体浓度下观察到GFP阳性感染细胞

Zika病毒感染细胞的明亮场和荧光覆盖图像

Zika病毒感染细胞的图像

抗体-RVP复合物的实施例图像显示作为抗体浓度的感染(GFP阳性)细胞数量的增加降低。

直接计数图像中的细胞

zika感染细胞的图像计数

Celigo用于计数明田的细胞总数,并鉴定直方图门控中的GFP阳性细胞。

  1. 在计数感染细胞的数量和每种抗体-RVP复合物的总细胞计数和使用肠中的门控功能的浓度后,产生感染百分比的剂量响应图,并计算IC 50值。

绿色:平均强度直方图

使用Celigo Gating功能进行抗体中和
  1. 剂量依赖性抗体中和IC50结果与FACS直接相比,并且具有高度可比较。

Celigo.

Celigo剂量依赖性抗体中和

使用Celigo的6个抗体的抗体中和剂量 - 反应曲线。

FACS.

FACS剂量依赖性抗体中和

使用FACS的6个抗体的抗体中和剂量 - 反应曲线。

IC50(μg/ ml) AB1. AB2. AB3. AB4. AB5. AB5.
FACS. 0.0077 0.0089 0.0017. 0.011 0.547 4.683
Celigo. 0.0090 0.0081 0.0042 0.011 0.489 0.307

使用96孔板的直接电池测量缩细胞病毒不同血清的抗体中和

  • ARPE上皮宿主细胞在96孔微孔板中接种并孵育24小时以使细胞粘附
  • 然后通过巨细胞病毒感染细胞并与不同血清的滴定孵育24小时
  • 最后,将细胞用与Alexa Fluor 647(AF647)或马萝卜过氧化物酶(HRP)缀合的一抗抗体染色
  • 染色后,使用Celigo图像细胞仪进行成像并分析细胞以计算受感染细胞的数量

使用马萝卜过氧化物酶(HRP)的基于明田的抗体中和测定

高血清HRP染色的感染细胞的明亮场图像

高血清HRP染色的感染细胞的明亮场图像

示例图像显示使用HRP在明场中具有高血清浓度的少量感染细胞

低血清的HRP染色感染细胞的明亮场图像

低血清的HRP染色感染细胞的明亮场图像

示例图像显示使用HRP在明场中具有低血清浓度的感染细胞的大量感染细胞

4血清的全板图像和抗体中和剂量 - 反应曲线

计数受感染的细胞剂量 - 反应

计数感染细胞的数量,并为4种不同的血清产生剂量响应曲线,其中计算IC50值。Celigo能够将计数结果直接输出到Excel进行分析。

使用AF647基于荧光的抗体中和测定

在高血清的AF647染色的感染细胞的荧光图像

在高血清的AF647染色的感染细胞的荧光图像

使用AF647显示图像显示荧光中具有高血清浓度的感染细胞数量

在低血清的AF647染色的感染细胞的荧光图像

在低血清的AF647染色的感染细胞的荧光图像

使用AF647显示图像显示具有低血清浓度的感染细胞的大量感染细胞

4血清的全板图像和抗体中和剂量 - 反应曲线

整形板图像和抗体中和剂量反应4血清曲线

计数感染细胞的数量,并为4种不同的血清产生剂量响应曲线,其中计算IC50值。Celigo能够将计数结果直接输出到Excel进行分析。