CAR - T细胞介导的细胞毒性

在96孔板上使用直接细胞计数直接测量CAR - T细胞介导的细胞毒性

  1. 在多个时间点扫描同一平板,直接监控目标细胞的杀死。
  2. 在15分钟内完成96孔板的全井成像和分析
  3. 不需要胰蛋白酶,然后执行冗长的流式细胞术协议。Celigo直接计数并报告每口井中剩余的目标细胞

CAR - T细胞介导的细胞毒性简介

嵌合抗原受体(CAR-T)技术的重点是产生一种基因修饰的t细胞,它可以直接结合并攻击感兴趣的细胞。CAR-T细胞由抗原特异性结合域组成,该结合域与基因工程激活基元融合。一旦在细胞表面表达,car - t细胞就可以靶向并攻击特定的靶向细胞。

协议

  1. 靶细胞(稳定表达GFP或用荧光染料标记)被播种在微孔板中
  2. CAR-T细胞以不同的效应器:Target (E:T)细胞比例添加到孔中
  3. 获取每个通道的全井图像,自动分析图像,报告剩余的GFP阳性靶细胞数量

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CAR - T细胞介导的细胞毒性的板内活细胞成像和定量

  1. 表达HIV病毒包膜蛋白的GFP-HEK293细胞接种于96孔板
  2. 然后将CAR-T细胞以不同的效应靶比(E:T)添加到每个孔中
  3. 随后在添加效应细胞后0、18、22和42小时扫描平板

不同E:T比值的目标细胞的荧光和计数图像

不同E:T比值的目标细胞的荧光和计数图像

上面的原始图像显示了不同E:T比值的GFP-HEK293细胞。存活最多的GFP-HEK293细胞是那些含有最少数量的CAR-T效应细胞。下面的一组图像显示了由Celigo软件识别和概述的GFP-HEK293细胞

  1. 由于在0小时首次对培养皿成像,我们能够建立每个孔中GFP-HEK293阳性细胞数量的基线
  2. 然后将所有数据归一化到时间0小时

CAR-T细胞诱导的细胞毒性/未转导的PBMC

CAR-T细胞诱导的细胞毒性/未转导的PBMC

y轴为GFP阳性HEK293细胞数量与0小时时间点相比的fold change。在42小时的孵育期后观察到最大的CAR-T细胞杀伤。CAR-T细胞在1:1和1:2 E:T比值下均能有效杀伤表达HIV的HEK293细胞

Celigo软件显示并报告平板水平结果:(42小时时间点)

Celigo软件显示并报告平板水平结果:(42小时时间点)

整个盘子在10分钟内被扫描和分析。平板水平视图显示了全井扫描的缩略图以及软件识别和计数的GFP阳性细胞的数量。