测量转导效率

直接测量96孔板中的直接电池计数的病毒转导效率

  1. 无需胰蛋白酶化细胞并在流量上运行
  2. 在<15分钟内对整个96孔板进行全井成像和分析
  3. 使用直播细胞成像和分析确定瞬态和稳定的转导速率
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细胞转染和转导的优化介绍

细胞转染和转导的优化包括选择方案,确定适当质量的质粒/病毒,并评估转染后的最佳时间/转染后的最佳表达的感兴趣的构建体。在Celigo细胞成像细胞仪上使用荧光报告器和原位成像的非破坏性成像,可以通过在一段时间内重复成像一组孔或烧瓶来迅速优化这些参数。准确的全井明场单元格计数生成基于单元的数据,该数据归一化为绝对小区数。

协议

  1. 板4 x 105.一个6个孔板中的细胞。
  2. 在室温和商店股票的冻病毒传染媒介库存冰
  3. 准备串行稀释度-1到10.-4
  4. 将1ml稀释的病毒加入到预镀细胞中并在37℃下孵育
  5. 在孵育2天后检查细胞的GFP表达
  6. 病毒滴度由EGFP阳性细胞的百分比确定

慢病毒转导效率的快速简便易用

  1. HEK293T细胞被播种并生长至80%的汇合
  2. 在10倍的连续稀释液中加入慢病毒
  3. 孵化后,Celigo用于为每个孔获得明亮的场图像和GFP图像并分析数据

明亮的场,荧光和慢病毒滴定的计数图像进行转导

明亮的场,荧光和慢病毒滴定的计数图像进行转导

图像显示为每个稀释度(底行),用于每个稀释度(顶行)的GFP阳性电池(顶部行)和识别和计数的Celigo软件的GFP阳性电池(在红色中概述的细胞)的GFP阳性细胞(中间排)显示的BFP阳性电池。

慢病毒感染细胞的数量

慢病毒感染细胞的数量
μl的GFP病毒 GFP阳性细胞的#
1 28,220
0.1 8,898
0.01 982.
0.001 71.
0.0001 18.

此数据显示Celigo具有广泛的单元格计数范围。它计算为每孔的18个GFP阳性细胞,每孔超过28,000种GFP阳性细胞。慢病毒转导细胞的数量显示与向每个孔中加入的病毒量成正比。

Celigo活细胞分析所有标记的细胞,以确定在不到15分钟的情况下表达GFP的细胞百分比

通过用Hoechst占据细胞,Celigo软件识别并计算每个Hoechst正和GFP正电池。因为Celigo在井中计数每个标记的单元格,它可以自动报告每个井中的细胞数量以及转换百分比。

转导人包皮成纤维细胞的图像和分析

转导人包皮成纤维细胞的图像和分析

用不同量的GFP Lentivirus进行和分析在胞生菌细胞仪上转导的图像和图像分析。

实时图像:转导成纤维细胞的分割

实时图像:转导成纤维细胞的分割

使用表达式分析应用程序的分割实时图像。核被分段为掩盖(左),GFP阳性核被分段为目标(右)以确定转导效率。