监控病毒感染

用多孔微孔板直接监测病毒感染的传播

  1. 全孔成像可以跟踪大细胞群中的病毒感染
  2. 进行板内感染,染色和显像,不需要胰酶
  3. 通过预先计算直接细胞计数来计算病毒感染细胞的百分比
  4. 提高产量,在<15分钟内扫描和分析96孔板
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病毒感染概论

通常,使用传统或半自动荧光显微镜平台对病毒感染进行可视化和成像。由于数据量化(计算病毒感染细胞的数量)通常是手工执行的,因此显示感染细胞的字段数量通常很低,需要相当长的时间来分析。Celigo图像细胞仪提供了快速成像和定量解决方案用于病毒感染活细胞分析.在总共15分钟或更少的时间内,整个96孔板被扫描,单个病毒感染细胞被检测,感染细胞的总数被自动量化。

协议

  1. 在培养皿中培养感兴趣的细胞
  2. 用病毒感染细胞
  3. 孵化预定的一段时间
  4. 通过细胞固定和抗病毒一、二抗染色,准备成像。如果病毒颗粒中含有像GFP这样的荧光蛋白报告,则直接进行成像
  5. 使用全井成像,在15分钟内扫描和分析整个96井板
  6. 导出数据到excel
  7. 导出高清晰度图像到jpeg, TIFF或位图

对病毒感染进行板内活细胞跟踪、成像和数据分析

呼吸道合胞病毒感染A549细胞24孔板的活细胞追踪

RSV感染A549细胞的活细胞追踪

捕获的图像显示,从感染24小时到48小时,GFP阳性细胞的数量和强度都在增加。未感染的对照细胞不含任何荧光染色。

24孔板追踪感染呼吸道合胞病毒的B2B细胞

从捕获的图像来看,从感染24小时到48小时,GFP阳性细胞的数量和强度没有增加。未感染的对照细胞不含任何荧光染色。

GFP阳性细胞百分比

直接测定A549和B2B细胞株的病毒感染和GFP阳性的细胞百分比。结果表明,在同一时间点,感染的A549细胞数量较B2B细胞数量显著增加。

GFP意味着强度

每个感染细胞系的平均GFP强度

每一感染细胞系的平均GFP强度也被测量并相互比较。感染后48小时A549细胞的GFP强度明显高于B2B细胞。

进行全井成像和分析,快速获取全板病毒感染数据

时间依赖性病毒感染扩散的荧光全孔图像

时间依赖性病毒感染扩散的荧光全孔图像

在24孔板上接种H4对照或H4敲除(KO)细胞,并感染水疱性口炎病毒(VSV)。在10分钟内对病毒感染的24孔板进行全孔成像。同一个车牌在多个时间点被扫描以追踪病毒感染。

荧光变焦图像依赖时间的病毒感染传播

荧光变焦图像依赖时间的病毒感染传播

放大了在VSV感染后12、16和20小时用药物X处理KO H4细胞的图像。GFP阳性细胞数量随时间增加,说明病毒感染增加。

GFP病毒感染的活细胞追踪

GFP病毒感染的活细胞追踪

Celigo生成的数据显示,与对照细胞系相比,敲除版本的H4细胞更容易感染水疱性口炎病毒。此外,药物治疗对减少对照细胞株和敲除细胞株的病毒感染均无效果。

病毒蛋白固定和免疫染色后监测病毒感染-图像和在几分钟内收集完整的数据

流感感染上皮细胞的完整图像

流感感染上皮细胞的完整图像

将上皮细胞接种于96孔板,用不同浓度的流感病毒感染。在感染6小时后(hpi),细胞被固定,并用抗流感特异性蛋白的一抗和Alexa Fluor 488偶联的二抗进行染色。对整个板块(亮场、AF488和Hoechst)的全井成像花费了13分钟。

感染细胞的明亮视野和荧光图像

感染细胞的明亮视野和荧光图像

Celigo在明亮的田野、绿色和蓝色(赫斯特)通道中捕捉图像。内置的分析软件可以识别每个Hoechst染色细胞以及每个AF-488病毒感染细胞。

AF488染色细胞百分比

AF488染色细胞百分比

流感病毒感染细胞的百分比与病毒的稀释成正比。1:1000稀释时感染细胞百分率最高。