病毒滴度测量

用荧光标记感染细胞的直接细胞计数法测定病毒滴度

  1. 高通量自动成像和分析直接在印版
  2. 直接计数感染细胞在平板上不胰酶化
  3. 在8分钟内成像并分析96孔板
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病毒滴度介绍

病毒的传染性对于决定病毒对抗宿主细胞的强度非常重要。为了确定病毒的传染性,通常采用病毒粒子滴定法感染宿主细胞,通过计算剂量反应来测定其传染性。这种活细胞分析方法可以用于多种宿主细胞和病毒类型来表征目标病毒。

协议

  1. 寄主细胞被播种并使其附着在96孔微板表面24小时
  2. 在平板上加入不同浓度或数量的病毒颗粒,测量病毒的传染性
  3. 感染细胞应用马萝卜过氧化物酶或荧光结合抗体或荧光病毒蛋白标记
  4. 使用Celigo图像细胞仪对宿主细胞样本进行活细胞分析,以计数感染细胞的数量或感染百分比

96孔板用mKate2荧光蛋白报告测定流感病毒滴定

  1. MDCK宿主细胞接种在96孔微板中,并使其粘附过夜
  2. 制备5倍滴定的mkate2流感病毒颗粒并添加到宿主细胞中
  3. 将标本孵育24小时,用Celigo图像细胞仪进行成像和分析,计数感染细胞的数量

表达mkate2的感染细胞的明亮视野和荧光图像

表达mkate2的感染细胞的明亮视野和荧光图像

示例荧光图像和门控显示mkate2流感阳性感染细胞的计数结果

传染性曲线存在剂量依赖的相关性

剂量依赖性感染曲线

利用Celigo的门控功能,可以测量mkate2 -流感阳性细胞的百分比,以生成感染曲线

96孔板用GFP荧光蛋白报告测定寨卡病毒滴定

  1. Vero和Raji寄主细胞被播种在96孔微板中,并让其粘附过夜
  2. 制备2倍滴定报告病毒颗粒(RVP-Green)并添加到宿主细胞中
  3. 将标本孵育24小时,用Celigo图像细胞仪进行成像和分析,计数感染细胞的数量

表达gfp的感染细胞的明亮视野和荧光图像

表达gfp的感染细胞的明亮视野和荧光图像

Raji细胞首先在亮场中被识别,GFP荧光直接在绿色通道中测量。用亮场法或Hoechst荧光法计数Vero细胞,测定GFP荧光

Raji细胞

测量兹卡病毒滴定raji细胞

维洛细胞

对Raji和Vero细胞的Celigo百分比感染结果直接与FACS进行比较,显示出高度可比的数据