选择实用的细胞计数方法,提高细胞计数结果的质量

基于ISO细胞计数标准第I部分

细胞计数已成为各种生物领域的关键因素

由于细胞和基因治疗、生物制剂生产和再生医学领域的重大进展,细胞计数的重要性在过去十年中显著增加。这就需要发展一种标准化的细胞计数方法。美国国会也认识到细胞计数和活力标准化的重要性21世纪治愈法案为了简化开发和质量保证,并促进细胞和基因治疗产品的监管批准。因此,这是美国食品和药物管理局(美国食品药品监督管理局),与国家标准与技术研究所(NIST)和国际标准化组织(ISO)发起了一项标准化细胞计数方法的努力,以提高细胞计数测量的可信度。

实用细胞计数方法的选择

ISO已发表两种细胞计数标准作为提高细胞计数结果的指导

广泛的生物样本类型、动态和异质性样本、不同的配方和生物处理步骤意味着细胞和基因治疗的细胞计数需求是高度独特和复杂的。此外,活细胞没有基础真实参考材料的事实增加了确定在定义的细胞计数的准确性的困难ICH协调三方指南-分析程序验证:文本和方法Q2 (R1)。因此,为了增加细胞计数结果的置信度,遵循最近发表的ISO细胞计数标准至关重要,ISO 20391 - 2:2019生物技术 - 细胞计数 - 第I部分:细胞计数方法的一般指导生物技术-细胞计数-第二部分:量化计数方法性能的实验设计和统计分析,以确保细胞计数方法是量身定制的特定样本和目的。

图1所示。选择最佳细胞计数方法的六个关键因素。

值得注意的是,在细胞计数方法的初始选择和评估之后,方法开发、优化、验证和分析方法验证之后的持续验证对于基于细胞的产品生产的下游工艺也至关重要。为了使细胞计数方法适合特定的实验需要,当前讨论的重点是为方法选择和评价的ISO标准提供见解和指导(图1)。为此,ISO细胞计数标准的重要方面已被提炼为六个可以影响细胞计数结果质量的关键因素,在选择适合的合适的细胞计数方法时应考虑这些因素。这些关键因素可分为三类:知识收集、细胞计数方法和操作保证(图1)。注意这些细节将会使研究人员更容易遵守ISO的建议,以确保高质量的细胞计数测量,并在这一过程中,网站可以小心翼翼地记录他们的基本原理,过程和数据报告FDA合规。

影响细胞计数方法选择和细胞计数测量质量的6个关键因素

  1. 确定单元格计数结果的预期用途(适用于目的),如肿瘤消化以进行基于单细胞的转录组分析,小鼠组织加工以进行细胞毒性分析,或分离人类PBMCs以进行免疫表型分析等。
  2. 探讨了解细胞样品组成,了解细胞组成(各种细胞类型、颗粒碎片、化学杂质和悬浮介质)以及它们的外观是很重要的。
  3. 了解测定原理并选择合适的细胞计数测定,如总细胞数、活细胞数、死细胞数、生存能力或细胞群分析。
  4. 调查功能并选择合适的单元格计数系统,其中系统由试剂、消耗品、仪器和软件算法组成。
  5. 将细胞计数为整个过程,包括取样、稀释和染色,这对正确的样品制备至关重要。
  6. 提供连续运营商培训,以确保一致的细胞计数结果。
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