来自外周血样品的白细胞直接计数不裂解红细胞

来自外周血的WBC介绍

作为外周血中最重要的细胞组分之一,白细胞的浓度通常用于研究各种疾病,例如细菌/病毒感染,白血病或白细胞。然而,常规方法计数白细胞包括耗时和繁琐的RBC裂解过程。

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荧光染色可用于通过将细胞膜可渗透的DNA染料(吖啶橙和碘化丙锭)与特异性染色白细胞的稀释的全血液样品混合来简化传统方法。这是许多复杂细胞群体表征测定的理想解决方案,例如在全血中快速计数白细胞。Nexcelom的Cellometer自动化单元计数器能够通过简单地将20μl处理的样品移液到较电池分子一次性计数室并将腔室放入仪器中来定量地分析WBC。由于计数室是一次性的,但样品之间不需要洗涤,因此没有不同样品的交叉污染的风险,并且降低了生物危害材料的风险。

使用专有算法,Cellometer的鲁棒操作软件精确分析单元图像,通常在不到60秒内生成计数数据。可以保存单元格图像和所有分析数据,包括小区大小分布直方图,以便进行文档。数据也可以轻松导出到Microsoft Excel电子表格以进行进一步分析。

AOPI染色了PBMC样品

将活成核细胞用AO(绿色)染色,死亡核细胞用PI(红色)染色。

计数AO / PI染色PBMC样品

Cellometer软件自动识别并计数染色的单元格。活性AO阳性细胞是绿色的概要,而Deav PI阳性细胞以红色概述。

Cellometer计数结果

计数结果框显示荧光细胞计数和浓度。

方法

直接AO / PI标记白细胞:

  1. 收集外周血样品(20-50μL)。
  2. 服用20μl血液样品并在180μlPBS中稀释样品。
  3. 将100μl吖啶橙/碘化丙啶(AO / PI)溶液混合至100μL稀释的血液样品。

运行试验

  1. 将20μl样品加载到一次性计数室中
  2. 将腔室插入Cellometer自动化单元计数器,荧光成像
  3. 从下拉菜单中选择“测定”
  4. 输入此示例的示例ID
  5. 预览单元格图像,然后单击“计数”开始分析样本
  6. 查看图像和计数数据。
  7. 保存或导出图像和/或报告数据。

Cellometer软件测定设置

结果

AO染色的WBC在获得的荧光图像中清晰可见。该软件指示具有绿色圆圈的计数单元(放大以显示细节)。结果显示表明荧光细胞计数并自动计算浓度。

荧光图像显示AO染色的WBC(左),并计数以绿色(右)盘旋的WBC。RBCS不可见。

还可以立即生成单元格和荧光尺寸分布直方图,散点图和数据文件。所有实验数据都可以立即转移到Excel电子表格或保存在数据表中。

Excel电子表格

Excel的数据输出示例。

数据表

所有计数结果都可以立即保存到数据表中。