啤酒厂酵母分析

酵母概述

酵母分析的重要性

酵母是一种经济上重要的生物,用于乙醇生产、饮料和替代燃料工业以及烘焙工业中的发酵剂。此外,酵母的致病菌株参与了植物和动物疾病。在酵母生产、发酵过程和用于监测致病酵母增殖的杀菌剂研究中,浓度和活力的测定是常规进行的质量控制目的。

询问专家
请求报价

测定酵母细胞数量和活力的最常用方法是在标准显微镜上手工计数血细胞计数器以及一种活性染料。这种方法的一个优点是,目视检查每个样品允许操作人员检查污染,干扰碎片的存在,和明显的稀释误差。一个主要的缺点是,手工方法是费力的,容易出错和获得的数据不容易追踪。尽管用于进行手工计数的设备相对便宜,但人工劳动和计数错误的成本足够高,使得手工计数在高度需要准确性、一致性和记录保持的生产设施中不实用。

基于荧光的图像细胞计数法测定酵母浓度和活力

1.用移液管吸取20µl样品

2.插入幻灯片

3.单击计数并获取结果

酵母计数和生存能力是如何通过双重荧光工作的?

将高粘度玉米泥样品与稀释缓冲液混合,并用细胞核染色染料染色。

活的有核细胞在蓝光激发下发出绿色荧光。

死亡细胞被绿光激发时发出红光。

然后根据颜色区分活细胞和死细胞,并根据活细胞/总细胞计数以百分比的形式生成存活率。

酿酒工业用酵母

一般来说,酿造过程中使用的酵母非常干净,很容易使用Cellometer图像细胞仪亮场功能进行计数。此外,为了测量酵母样品的活力,碘化丙啶(PI)或恶酮是可以染色死细胞的荧光活力染料。因此,在亮场图像中测量总细胞计数,在荧光图像中测量死细胞计数。

亮场分析法测定酵母浓度

单一的细胞计数

使用Cellometer图像细胞仪自动测量酵母细胞大小和浓度。

酵母细胞的去聚集

先进的软件解簇算法可以解簇到单个细胞,以产生更精确的浓度和大小测量。

Chain-Forming细胞计数

先进的软件解聚类算法还可以将形成链的酵母解聚类到单个细胞,以生成更精确的浓度和大小测量。

电池浓度线性范围和可靠性

在Cellometer Auto X4(10x)上对复水酵母的连续两倍稀释液进行计数,以确定可靠酵母浓度测量的线性范围。可在仪器上测量的浓度范围取决于被计数细胞的大小(即,范围随着细胞大小的增加而减小)。Muntons菌株在再水化时直径约为4.5µm,与其他酵母菌株(如用于啤酒或葡萄酒生产的酵母菌株)相比,Muntons菌株尺寸适中,因此被选择用于本实验。通过检查计数图像确定的准确酵母计数上限表示原始浓缩酵母悬浮液(稀释液2)在6.6 x 10的条件下稀释四倍7.细胞/毫升。计数该样品的连续稀释量,直到达到4.17 × 10的浓度下限(稀释6)6.细胞/毫升。

测量的浓度与浓度因子(稀释因子的倒数)的绘图结果是与R的线性关系2.0.9968。因此,在Cellometer Auto X4 (10x)上计数蒙氏酵母(和其他类似大小的菌株直径4.5µm左右)的线性范围在4 × 10之间6.和6.6 x 107.细胞/毫升(图1)。

对样本进行重复测量,通过计算变异系数(CV)来确定计数的可靠性。在Cellometer Auto X4 (10x)上计数酵母的线性范围内,CV在4%到13%之间(图1B)。

图1A

图1B

稀释 平均浓度 个人简历
2. 6.58E+07 6%
3. 2.99E+07 4%
4. 1.55 e + 07 7%
5. 8.84E+06 10%
6. 4.17 e + 06 13%

精确酵母浓度测量和相应CV值的线性范围。

用亮场荧光法测定酵母浓度和活力

使用碘化丙啶(PI)测量生存能力

让蒙顿酵母再水合30分钟,然后用碘化丙啶(使用FOM VB-595-502或VB-660-503)1:1染色。立即使用玻璃纤维计对酵母菌进行分析,以测量其活力、浓度和细胞大小。计算亮场图像以测量总细胞数,而计算荧光图像以测量死亡细胞数。

用Oxonol测定活性

让Munton酵母再水化30分钟,然后用oxonol(使用FOM VB-535-402)1:1染色。培养5分钟后对酵母进行分析,使用玻璃纤维计测量活力、浓度和细胞大小。计算亮场图像以测量总细胞数,而计算荧光图像以测量死亡细胞数。

细胞活力测量的准确性和可靠性

将等份的活酵母悬浮液和热灭活酵母混合,以产生不同活性水平的样品。活酵母样品的测定存活率为78%,而热灭活样品的测定存活率为0%。将活酵母和死酵母的部分混合以分析中间活性水平。

测得的存活率与最终混合物中热灭活细胞的百分比相对应,并与R呈线性相关2.为0.9996。预测生存力与测量生存力的比较显示高度一致,生存力测量的复制品的标准偏差为≤ 1.3%(图2A,B)。综上所述,在Cellometer Auto X4(10x)上使用PI进行的生存能力测量具有高度的可重复性和可靠性。

图2A

图2B

活的/死的 预测 仔细斟酌的 圣开发
100%/0% 78% 0.4%
75%/25% 59% 58% 1.2%
50% / 50% 39% 39% 0.6%
25%/75% 20% 19% 1.3%
0% / 100% 0% 0% 0.4%