细胞大小分析

单元格大小测量简介

细胞大小测量是研究人员跨多个学科进行的一种常见检测方法:从确定干细胞的分化能力1,用于测量脂肪细胞的大小2,利用Sf9细胞和杆状病毒制备重组腺相关病毒。3.

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目前测量细胞大小的方法通常包括捕捉显微镜图像和使用辅助软件测量细胞直径。Cellometer系统在每个样品不到30秒的时间内完成这些任务!

A498细胞

图片显示了A498细胞(右)和所有计数的细胞(左)用绿色细胞轮廓表示。

计数A498细胞>直径15µm

右侧为A498细胞,左侧为> 15µm细胞。计算的单元格由绿色的轮廓线确认。小于15µm的细胞不计算在内。

Cellometer使用“精确细胞膜轮廓算法”来生成每个细胞周围的细胞膜轮廓。计数完成后,为每个计数单元格生成一个绿色的轮廓。这种复杂的算法允许一致的识别所需的细胞群,并提供可靠和准确的细胞计数,浓度,活力和细胞大小的测量。

此外,由于cell size参数可以在Cellometer软件中定制,用户可以只计算那些位于指定cell size范围内的cell。在这种情况下(上图最右边所示),只有在15到30微米之间的细胞被计数。

NCI-60肿瘤细胞系细胞大小的测量

测量细胞大小的能力已经成为研究人员检查药物对癌细胞影响的一个有价值的工具。许多NCI-60肿瘤细胞系具有明显不同的形态特征和细胞大小。

Cellometer使用“精确细胞膜轮廓算法”来生成每个细胞周围的细胞膜轮廓。当计数完成时,可以看到每个计数单元格周围的绿色轮廓。这种复杂的算法允许一致的识别所需的细胞群,并提供可靠和准确的细胞计数,浓度,活力和细胞大小的测量。每次计数后,一个细胞直径直方图自动生成,代表被计数群体的细胞大小分布。

786 - o细胞

细胞计数仪计数786-O细胞

台盼蓝染色786-O细胞

786-O细胞直径直方图

在这个实验中,测量786-O细胞的平均细胞直径为17.6微米。从细胞直径直方图我们可以估计大约60%的细胞直径在16.6 - 18.6微米之间。

sw - 620细胞

台盼蓝染色SW-620细胞

Cellometer计数SW-620细胞

sw620细胞直径直方图

与786-O细胞相比,SW-620细胞的平均直径为11.1微米。观察细胞直径直方图,大约75%的细胞直径在10.5 - 12.0微米之间。

蛋白表达过程中SF9的大小测量

SF9细胞图像

检测SF9蛋白表达前和表达过程中细胞大小、浓度和活力。左边的显微照片显示了平均直径为13.0微米的小细胞。这个种群用绿色条形线显示在“细胞直径直方图”中。在蛋白表达过程中SF9细胞的大小增加,在右图中,细胞的平均直径为23微米。

SF9细胞直径直方图

从PBMC样本培养成熟树突细胞计数

从外周血单个核细胞中培养树突状细胞(DC),用Cellometer Auto T4成像。成熟的树突状细胞在显微图和细胞大小直方图上都更大。因此,设置直流电池类型参数来区分直流电池和较小尺寸的电池。基于这些参数,Cellometer自动确定选定群体的细胞浓度。

成熟的树突细胞

细胞大小的柱状图

电池类型#1:成熟DC

浓度:2.3 × 106/毫升
平均直径:13.0µm

细胞类型#2:PBMC中的小细胞

浓度:2.7 × 106/毫升
平均直径:5.9µm

测量脂肪细胞大小

大鼠脂肪细胞平均直径为62.3 mm

脂肪细胞已被用于许多涉及肥胖、代谢、脂肪生成和糖尿病的研究。上面的显微照片显示了已计数的大鼠脂肪细胞(用绿色标出)和它们的细胞大小。注意,图像中间的大脂滴没有计算在内。要考虑到脂肪细胞的大小,特殊PD300幻灯片有,专为细胞>80微米直径。所有的测压仪,不包括我们的10x仪器,都与PD300腔兼容。

骨髓间充质干细胞的细胞大小测定

从人骨髓中可以分离出多能的非造血干细胞,如骨髓间充质干细胞(MSC)。这些非造血的骨髓间充质干细胞具有自我更新和分化的能力。如上所示,MSC来源于第一次传代后的骨髓单个核细胞。细胞大小和浓度用Cellometer愿景

测量间充质干细胞的细胞大小

Cellometer应用文献综述

定量检测人骨髓间充质干细胞成脂潜能和克隆原性的供体和传代差异

Jessica Lo Surdo和Steven R Bauer

组织工程C部分:方法

FDA / CER / CELLURAL和组织疗法分支

在间充质干细胞(MSCs)的群体中,已广泛观察到细胞性质的可变性,例如增殖,形态,分化能力和细胞表面标记表达式专用。研究人员不断提高由于MSC异质性而改善细胞表征。MSCS可塑性(区分成许多不同的细胞类型)可能是由于在活的有机体内微环境和长期体外培养。虽然目前存在定性和定量评估不同供体间充质干细胞的方法,但本文讨论了能够检测传代、供体差异和间充质干细胞亚群差异的可靠定量测量方法的发展。的总体目标这项工作的主要目的是开发和使用定量测量方法,通过确定供体变异性和传代数的作用,改善间充质干细胞的特性,因为这与间充质干细胞的生物学特性和质量有关

其中一个测试参数是单元格大小。本实验采用台台蓝1:1稀释细胞,使用自动细胞计数器(Cellometer T4)计数,测定MSCs细胞大小。

从两名供体中采集间充质干细胞,经多次传代后测量细胞直径。随着传代次数的增加,两种供体间充质干细胞的细胞直径均增加。然而,来自两个供体的细胞大小的变化并不一致。结果表明,细胞大小不仅与传代有关,而且与患者有关。

使用Cellometer进行细胞大小测量的出版物

  1. Lo Surdo J, Bauer SR.(2012)定量方法检测人类骨髓源性间充质干细胞成脂潜能和克隆原性的供体和传代差异。组织工程。C部分,方法18(11): 877 - 89。
  2. Lee JH, Kirkham JC, McCormack MC等(2012)一种新的脂肪细胞分析方法。整形外科杂志29(2): 380 - 387。
  3. Cecchini S, Virag T, Kotin RM。(2011)利用无脊椎细胞在0.02- 200升培养中生产的重组腺相关病毒的可重复性高产量。人类基因治疗8(22): 1021 - 1030。
  4. Guercio A, Di Marco P, Casella,等(2012)从脂肪组织中生产犬间充质干细胞及其在慢性肱骨桡关节骨关节炎犬中的应用。细胞生物学国际36(2): 189 - 94。
  5. 黄志强,王志强,王志强,等。(2012)红粉甲虫(Tribolium castaneum,鞘翅目:拟步甲科)的细胞系。体外细胞和发育生物学-动物48 (7): 426 - 433
  6. Grunow B, Noglick S, Kruse C, Gebert M.(2011)大西洋鲟鱼oxyrinchus oxyrinchus细胞分离及培养条件优化。水生生物学14 (1): 67 - 75
  7. Norelli J.(2013)苹果果实素PR-8基因的潜在作用及酵母拮抗剂的作用方式,假丝酵母oleophila,在采后生防葡萄孢菌采后生物学与技术85: 203 - 209
  8. Clow AL, Gaynor PT, back BJ。(2010)一种集成了介电泳和电融合核转移的新型微坑装置。生物医学微器件12 (5): 777 - 86
  9. 陈Q,Livesidge XL,Liu B等。(2011)氧气浓度是否会影响滋养细胞的脱落或从前三个月的人胎盘产生炎症介质?胎盘32 (5): 362 - 6
  10. (1)结节性硬化症(结节性硬化症,结节性硬化症,结节性硬化症,结节性硬化症,结节性硬化症,结节性硬化症)。免疫学杂志188 (8): 3658 - 66
  11. 高盐促进细胞衰老。细胞周期6(24): 3108 - 13所示