表面标记物及蛋白检测

细胞表面和细胞内蛋白质标记的介绍

细胞表面蛋白和细胞内蛋白是识别特定类型细胞和细胞群特征的重要标记。传统上，这些检测是在流式细胞仪上进行的。近年来，基于图像的细胞计数方法已被用于许多标准的细胞表面和细胞内蛋白检测，为细胞群体分析提供了一种更简单、快速的方法。Cellometer Vision CBA图像细胞仪是专门设计用于进行表面标记和细胞内蛋白荧光分析，以描述细胞群体。以下是使用Cellometer图像细胞计数法进行的一些分析的例子。

人活化T细胞- CD44-APC

人t细胞用APC标记的抗cd44染色，并在Cellometer Vision CBA上成像。计算后的亮场图像显示了由Cellometer软件自动识别的t细胞，并用绿色标出。荧光APC图像显示阳性t细胞的红色表面标记物染色。将每个细胞的平均荧光强度值输出流式细胞术软件FCS表达，并绘制直方图。门控数据显示，95%以上的细胞CD44阳性。

人活化T细胞- CD44-PE

与上述实验类似，用藻红蛋白(PE)偶联的抗cd44对人t细胞进行染色，并在Cellometer Vision CBA上成像。计算后的亮场图像显示了由Cellometer软件自动识别的t细胞，并用绿色标出。荧光PE图像显示阳性t细胞的橙色表面标记物染色。将每个细胞的平均荧光强度值输出流式细胞术软件FCS表达，并绘制直方图。门控数据显示，95%以上的细胞CD44阳性。

小鼠骨髓巨噬细胞- CD11b-PE

原始骨髓样本用PE偶联的抗cd11b染色，这种细胞表面受体存在于多种细胞类型的表面，包括单核吞噬细胞，也就是巨噬细胞。20微升的染色样本在Cellometer Vision CBA系统上成像。亮场图像中显示的绿色圆圈代表自动计数和勾勒出的单核细胞。荧光图像显示CD11b阳性细胞的明亮染色轮廓。将每个细胞的平均荧光强度值输出流式细胞术软件FCS表达，并绘制直方图。门控数据显示，约84%的细胞CD11b阳性。

人Jurkat细胞- CD3-PE

培养的Jurkat细胞用PE标记的抗cd3表面标记物染色，并在Cellometer Vision CBA上成像。计算后的亮场图像显示了由Cellometer软件自动识别并以绿色标出的Jurkat细胞。荧光PE图像显示CD3阳性Jurkat细胞表面标记物呈橙色染色。将每个细胞的平均荧光强度值输出流式细胞术软件FCS表达，并绘制直方图。门控数据显示，超过80%的细胞CD3阳性。

人PBMC - CD3-FITC

采用FITC标记的抗cd3表面标记物对原发性外周血单个核细胞(PBMC)进行染色，并在Cellometer Vision CBA上成像。计算后的亮场图像显示了Cellometer软件自动识别并以绿色标出的细胞。荧光FITC图像显示CD3阳性单核细胞表面标记物绿色染色。将每个细胞的平均荧光强度值输出流式细胞术软件FCS表达，并绘制直方图。门控数据显示，近90%的细胞CD3阳性。

人类PBMCs - CD3-PECy5

与上述CD3-FITC实验相似，用抗cd3 PE-Cy5共轭串联染料对初级外周血单个核细胞(PBMC)样本进行染色，并在Cellometer Vision CBA上成像。请注意，这种串联染料是藻红蛋白(PE)和花青素(Cy5)的组合，具有广泛的发射光谱，并使用APC滤波模块成像。计算后的亮场图像显示了Cellometer软件自动识别并以绿色标出的细胞。荧光图像显示红色表面标记物染色阳性的单核细胞。将每个细胞的平均荧光强度值输出流式细胞术软件FCS表达，并绘制直方图。门控数据显示，约65%的细胞CD3阳性。

人类PBMCs - CD19-PECy5

采用抗cd19 PE-Cy5共轭串联染料对原发性外周血单个核细胞(PBMC)进行染色，并在Cellometer Vision CBA上成像。请注意，这种串联染料是藻红蛋白(PE)和花青素(Cy5)的组合，具有广泛的发射光谱，并使用APC滤波模块成像。计算后的亮场图像显示了Cellometer软件自动识别并以绿色标出的细胞。荧光图像显示红色表面标记物染色阳性的b细胞。将每个细胞的平均荧光强度值输出流式细胞术软件FCS表达，并绘制直方图。门控数据显示，约10%的细胞呈CD19 b细胞阳性。

小鼠细胞-小鼠IgG-FITC和RFP

CD44 - PE

MHC Dextramer- CD8-FITC和Dextramer- pe

人T细胞和细胞因子- CD8-PE和INFg-FITC

蛋白通路研究的细胞内蛋白

细胞中存在着各种复杂的蛋白质，它们是由细胞功能产生或去除的。这些蛋白质可以作为一种指标，用来测量细胞的某些蛋白质通路或功能，以确定它们是正常运行还是异常运行。这些细胞内蛋白可以用荧光标记和测量视觉CBA图像细胞仪以确定与这些蛋白质相关的细胞群。

MNNG癌细胞热休克蛋白- HSP90-PE和GFP

MNNG癌细胞的热休克蛋白- Grp78-Alexa Fluor 594和GFP

再生医学的干细胞分析

干细胞标记物常用于测定血液、脐带血、骨髓和脂肪组织中的干细胞群。这些细胞对再生医学的研究非常重要，而在细胞样本中快速描述干细胞群的能力可以极大地提高研究效率。视觉CBA图像细胞仪可以用来测量一些常见的干细胞标记的细胞群。

小鼠iPS细胞- SSEA-1-PE

人类iPS细胞- SSEA-4-PE

人类iPS细胞- TRA-181-PE

CACO2癌症干细胞- CD133-FITC