脂肪细胞

脂肪细胞分析简介

脂肪细胞,又称脂肪细胞,在许多生物学研究中都很重要。脂肪细胞的大小和数量与脂肪组织代谢直接相关。由于脂肪细胞的易碎性和体积大,历来是难以使用的样本。由于脂肪细胞储存能量,它们被用于许多代谢、糖尿病和肥胖研究。此外,由于抽脂物现在被用作脂肪源性间充质干细胞的来源,从脂肪细胞中分离免疫细胞可能也很重要。

请求报价
问一名专家

细胞浓度和细胞大小的测量通常是手动或使用外部软件后显微术进行的。在胶原酶消化过程中,传统的手工血细胞仪方法在区分完整脂肪细胞和破裂脂肪细胞产生的脂滴方面存在技术挑战。可用的自动细胞计数方法通常需要复杂的样品制备和使用危险试剂。

Cellometer集成了总细胞计数和荧光检测在一个易于使用的仪器。在不到一分钟的时间内,该系统可以生成准确的细胞计数结果,并报告细胞大小。各种原代脂肪细胞,如人、小鼠、大鼠等,直径为25um至250um,可轻松装入一次性脂肪细胞计数室,消除液体处理可靠性问题。

测量脂肪细胞的Cellometer仪器

有三种Cellometer仪器能够进行adipocyte测量:CBA愿景汽车2000年,以及K2。这三种仪器都使用专门的仪器(pd - 300)计数室以容纳大细胞。受控室深度消除了脂肪细胞浮力引起的潜在问题。可以容易地装载25μm至250μm的各种初级脂肪细胞,例如二径为25μm至250μm的一定的计数室,专为脂肪细胞而设计,以消除液体处理可靠性问题。需要55μl以加载计数室载玻片。直接从计数室成像消除了基于流动的系统中存在的剪切应力,其中细胞通过仪器行进,可以准确地分析脆弱的脂肪细胞。

简单易用的程序

脂肪细胞亮场检测与细胞大小测定

明亮的田间形象

计数亮场图像

脂肪细胞的结果

单元格大小直方图

在许多研究中,测量脂肪细胞的大小是建立基线或从下游实验中获得测量的一个重要方面,如观察细胞大小与能量和葡萄糖代谢之间的关系。上面的图像是在Cellometer Image Cytometer上使用亮场检测获得的。左上方的图像是一个标准的亮场图像。右上角的图像是经过计数的图像。Cellometer图像软件用绿色勾勒出每个计数的单元格。在这张图中,我们看到只有脂肪细胞被计数,而脂滴(箭头所示)没有被计数。生成细胞直径直方图,显示计数脂肪细胞的大小分布。细胞计数完成后,结果显示计数的细胞数、浓度和平均细胞直径。

碘化丙啶测定脂肪细胞活力

PI治疗脂肪细胞

由纤维测定仪报告的结果

收集的己二酸乙二醇酯样品的活性对于确定样品的健康度至关重要。无论是经过处理的样本还是未经处理的样本,准确的生存能力测量都可以确定样本的处理方式或数据的解释方式。与传统细胞不同,脂肪细胞的细胞核通常位于细胞的外围。为了获得存活率,首先在明亮区域(绿色圆圈)对所有细胞进行计数。因为PI是一种膜排斥染料,所以在绿色圆圈显示的荧光图像中,只有死去的PI染色细胞才被计数。PI阴性且未计数的活细胞显示为红色圆圈。此外,由于游离核不是整个细胞的一部分(我们可以通过查看亮场图像来验证),因此它们被排除在死细胞计数之外(白色箭头)。因此,Cellometer软件会报告计数的活细胞和死细胞数量、浓度、每个群体的平均细胞直径以及存活率。

钙黄绿素-AM检测脂肪细胞酶活性

钙黄绿素AM处理的脂肪细胞

由纤维测定仪报告的结果

通过用Calcein AM染色细胞来测量细胞样品的活力。Calcein AM(Calcein乙酰氧基甲基酯)是细胞可渗透的非荧光化合物。在穿过细胞膜时,Calcein Am通过活细胞内通过细胞酯酶迅速水解。水解切割AM组,将非荧光钙蛋白AM转化为强绿色荧光浓度。不具有活性细胞质酯酶的细胞不能将Calcein Am转化为Calcein,因此不荧光绿色(荧光图像中的红圆圈)。这允许快速且易于检测样品中的代谢活性细胞。一旦计数完成,Cellometer软件就会报告明亮场中的计数细胞的总数和元素活性,浓度和每种人群的平均细胞直径的细胞数以及样品的百分比活力。

绿色荧光蛋白标记脂肪细胞的检测

绿色荧光蛋白标记的脂肪细胞

由纤维测定仪报告的结果

一些实验室有兴趣检测和计算GFP标记的adipocytes的数量。检测强度绿色的荧光细胞并计数(绿色概述的圆圈),而弱和非荧光脂肪细胞不计数(红色轮廓圈)。一旦计数完成,Cellometer软件就会报告明亮场中的计数细胞总数和GFP阳性的细胞数,浓度,每种群体的平均细胞直径,以及GFP阳性细胞的百分比。

选择性纤维测定仪应用文献综述

应激刺激大鼠脂肪细胞产生儿茶酚胺

kvetansky R, Ukropec J, Laukova M, Manz B1, Pacak K2Vargovic P
细胞和分子神经生物学。2012年7月;32(5):801-813
斯洛伐克,斯洛伐克共和国布拉斯拉夫斯洛伐克科学院实验内科学院

1LDN劳工诊断尼尔,德国
2国家儿童健康与人类发展研究所,NIH,贝塞斯达,美国

意义:

在脂肪组织中,儿茶酚胺(CAs)在调节脂肪组织代谢中起着关键作用。本研究的目的是探讨不同应激源(情绪固定和物理寒冷)对脂肪细胞中钙生成的影响。从应激大鼠肠系膜脂肪组织中分离出间质血管碎片(SVF)。在这篇文章中,研究人员报道了应激诱导脂肪细胞产生CA,从而表明这种新的CA系统直接参与了应激反应的调节。该研究的总体重要性较大表明肠系膜脂肪组织中的应力应力与应激诱导的脂肪组织(脂肪组织生产)程序相关,提供应力,肥胖和代谢疾病之间的直接联系。

样品处理:

从大鼠收集肠系膜脂肪组织(200-300mg)。胶原酶I消化后(30分钟,37°C,持续温和搅拌),随后用1.5 ml培养基洗涤脂肪细胞的漂浮部分4次。每个洗涤步骤后进行离心。通过洗涤和过滤将颗粒化细胞与漂浮细胞层分离。漂浮细胞悬浮液通过210μm尼龙网过滤器过滤,以去除任何可能含有非脂肪细胞的剩余细胞团。从脂肪细胞分离的离心颗粒细胞部分被认为是基质部分。

实验设计:

由于富含脂肪的脂肪细胞会浮在上面,研究人员利用这一方法将漂浮的脂肪细胞从非漂浮的细胞中分离出来。然后,他们分析了每个洗涤步骤前后的非浮动细胞。取脂吸液后,收集脂肪细胞的漂浮部分并洗涤。(第一次洗涤)将收集到的顶馏分洗涤并纺丝。底层(这里称为:inffranant)被分析是否存在免疫细胞。(第二次洗涤)收集第一次洗涤的上层脂肪细胞,洗涤后纺丝。再一次,我们分析了底层的免疫细胞。这样做了4次。
使用Nexelcom, cellometer T4 plus (Nexcelom Bioscience, LLC)自动组织形态学分析监测脂肪细胞制剂的纯度。乐动体育-南安普顿合作伙伴

一种

基质/血管部分(未冲洗)

脂肪细胞第4次清洗后的基础液

1次洗涤脂肪细胞后的非醛呢

第4次洗涤后的脂肪细胞分数

结果

“使用Nexelcom、cellometer T4 plus(Nexelom Bioscience,LLC.)进行自动组织形态学分析的结果。”这种创新的成像和荧光技术允许实时查看细胞形态,乐动体育-南安普顿合作伙伴以便在细胞计数后进行视觉确认。显示了SVF、第1次和第4次洗涤中的洗涤细胞群以及纯化脂肪细胞组分的分析。箭头指示存在巨噬细胞样细胞(9–12µm)。”

第4次洗涤后的脂肪细胞分数

结论

使用Cellometer图像细胞仪进行脂肪细胞分析是许多脂肪细胞样本的理想选择。仪器在60秒内测量浓度和细胞直径的能力提高了计数效率和一致性。此外,荧光性能也不容忽视。通过进行活力和活力测定,研究人员可以对他们的样本质量有信心,并有能力确定处理前和处理后的细胞状况。要确定哪种仪器最适合你,请咨询专家。

问一名专家

给我们打电话978-327-5340。有经验的Nexcelom应用专家可用cf欧洲杯竞猜美国东部时间上午8:30到下午5:30协助选择Cellometer系统。

使用纤维测定仪进行脂肪细胞分析的出版物

  • Lee JH,Kirkham JC,Austen WG JR等人。(2012)一种新型脂肪细胞分析方法。整形和重建外科129(2):380-7
  • Kvetnansky R,Ukropec J,Vargovic P等人。(2012)胁迫刺激大鼠脂肪细胞中儿茶酚胺的产生。蜂窝和分子神经生物学32(5): 801 - 13所示
  • Angle BM,Do RP,Taylor JA,et al.(2013)由于胎儿暴露于低而非高剂量双酚A(BPA)对雄性小鼠的代谢破坏:影响体重、食物摄入、脂肪细胞、瘦素、脂联素、胰岛素和葡萄糖调节的证据。生殖毒理学6238(13)00231-1

使用Cellometer研究脂肪细胞组分的出版物

  • AA Ismail,S Wagner,H Murua Escobar,et al.(2012)高迁移率组a蛋白应用对体外犬脂肪间充质干细胞的影响。兽医国际第752083卷:1-10
  • kajiya t,ho c,kurtz tw等。(2011)Azilsartan的分子和细胞作用:一种新一代血管紧张素II受体阻滞剂。高血压杂志29日(12):2476 - 83
  • Carvalho PP,Gimble Jm,Reis Rl等。(2010)人脂肪衍生的基质/干细胞:在室温下使用动物游离产品和延长储存。Semana de Engenharia.
  • 京威L,Kai T,Xiaoyan L等人。在脂肪仪衍生的干细胞中的剪切仪细胞术在施用定量分析中。(2012)中华美容整形外科杂志23日(3)
  • Renzi S,Lombardo T,DessìSS等(2012)间充质基质细胞冷冻保存。生物保护和生物库10(3): 276-281
  • Carvalho PP,Wu X,Gimble JM等人(2011年)使用无动物蛋白产品传代粘附的人脂肪基质/干细胞。Cytotherapy13(5):594-7
  • Guercio A, Di Marco P, Piccione G,等(2012)从脂肪组织中生产犬间充质干细胞及其在慢性肱骨桡关节骨性关节炎犬中的应用。国际细胞生物学36 (2): 189 - 94