肝细胞

肝细胞的概述

肝细胞是肝脏中的主要细胞,包含约60%的肝细胞和80%的肝脏肿块。肝细胞布置在分支和吻合物或互连的板中。大多数肝细胞具有单个核,但小细胞细胞很常见。每肝细胞大约有1,000个线粒体。大约15%的细胞体积包括平滑且粗糙的内质网。每种细胞有大约30个溶酶体和500个过氧化物体。其中一个主要的肝细胞功能是生产胆汁。肝细胞也负责调节代谢,解毒和重要循环蛋白的制造,使其成为涉及肝病,药物代谢和毒理学的关键组分。

请求报价
问一名专家

肝细胞是肝脏中的主要细胞,包含约60%的肝细胞和80%的肝脏肿块。肝细胞布置在分支和吻合物或互连的板中。大多数肝细胞具有单个核,但小细胞细胞很常见。每肝细胞大约有1,000个线粒体。大约15%的细胞体积包括平滑且粗糙的内质网。每种细胞有大约30个溶酶体和500个过氧化物体。其中一个主要的肝细胞功能是生产胆汁。肝细胞也负责调节代谢,解毒和重要循环蛋白的制造,使其成为涉及肝病,药物代谢和毒理学的关键组分。

准确肝细胞计数的重要性

主要肝细胞定期用于测量药物筛选过程中药物候选物的毒性。大多数细胞毒性测定是基于板的测定,涉及每个孔中肝细胞的镀层。精确和准确的细胞浓度和活力测量对于获得可重复的高质量数据至关重要。

多孔板

多孔板用于筛选不同浓度的候选药物,通过重复测量,生成大量数据点进行分析和比较。

多孔板需要使用相同数量的细胞,具有已知的存活率,以正确地解释数据。

肝细胞挑战和Cellometer解决方案

由于肝细胞形态多变、易碎、容易结块,传统的手工计数方法既费时又不准确。由于肝细胞会随着时间的推移而丧失活力,延长或变化的计数时间会产生不准确和不一致的活力测定。由于血流诱导的剪切应力,肝细胞太脆弱,无法使用流式细胞术进行评估。

Dual-fluorescence染色过程

取20µl肝细胞样品与20µl ViaStain™AO/PI染色液混合,测定肝细胞活力。吖啶橙(AO)染料染色所有有核细胞的DNA,产生绿色荧光,很容易从碎片中区分肝细胞。碘化丙啶(PI)用受损细胞膜对所有细胞的DNA进行染色,产生红色荧光。在AO和PI染色的细胞中,绿色荧光通过荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer, FRET)被红色荧光吸收,死亡的肝细胞均呈红色荧光,易于计数。这个过程快速、温和、准确。

Circometer仪图像细胞仪是测定肝细胞浓度和活力的理想方法,克服所有困难的肝细胞特征:

肝细胞挑战 Cellometer解决方案
脆弱的 Non-fluidic成像系统
形状不规则 用于计数不规则(非圆形)形状的专用算法
大小变量 用户可调尺寸范围计数
形成一簇或一簇 专有的Cellometer软件识别并计算集群内的各个单元格
随着时间的推移失去活力 分析<60秒

亮场图像和AO和PI计数叠加

Cellometer仪器自动捕捉和分析多个图像。计算过的活细胞用绿色标出,而计算过的死细胞用红色标出。

使用这种方法,Cellometer Vision已经成功地计数了许多种肝细胞,包括以下几种:

  • 人类

  • 鼠标

  • 虹鳟鱼

  • 兔子

更多的物种可以被分析

使用吖啶橙/碘化丙啶(AO / PI)测量细胞浓度和活力

混合后立即将20µl染色样品装入Cellometer计数室并插入Cellometer仪器。样品直接从计数室中成像。由于计数室是一次性的,样品之间不需要清洗,也没有交叉污染的风险。使用预先设定的原代肝细胞参数对样本进行成像和分析。可以查看明亮的视野和荧光细胞图像,以检查细胞形态和验证细胞计数。细胞总数,浓度和平均直径自动显示。

AO /π协议

  1. 获得Nexcelom AO / PI解决方案:访问我们的试剂页面
  2. 用AO / PI溶液为1:1的染色细胞样品
  3. 负载计数室幻灯片和分析

1.移液管20μl样品到一次性载玻片中。

2.将滑块插入仪器

3.从下拉菜单中选择“测定”

4.单击“计数”,获取图像和查看单元格计数,浓度,直径

自动生存率结果

明亮的场和荧光肝细胞图像

明亮的场地图像(左)显示原发性肝细胞的可变形态。双荧光图像(右)显示计数活肝细胞(以绿色环绕)并计数死肝细胞(以红色为单位)。

肝细胞活力结果

单元格图像和数据可以立即保存到安全网络或直接从Cellomomer软件打印。

可以将图像和表格导出到Excel或PowerPoint以进行进一步分析,演示或发布。

自动分析和报告消除了操作员之间的可变性和计数或记录中潜在的用户错误。

Cellometer软件报告:

  • 细胞计数
  • 细胞浓度
  • 细胞活力
  • 细胞直径

结论

Cellometer K2视野和视野CBA仪器是寻求对原发性肝细胞进行准确活力和浓度测量的研究人员的理想选择。由于原发性肝细胞的脆性性质,Cellometom速度图像细胞计数是在保留细胞的健康时测量细胞活力的最佳方法。

使用细胞计仪器进行肝细胞分析的出版物

  • Shan J,Schwartz Re,Ross NT等人。(2013)鉴定人肝细胞膨胀和IPS分化的小分子。NAT CHEM BIOL.9 (8) 514 - 520
  • Schwartz J,Holmuhamedov E,张X等。(2013)米诺环素和十氧环素,但不是其他四环素衍生的化合物,通过抑制线粒体钙的单人来保护肝细胞免受化学缺氧和缺血/再灌注损伤。毒素苹果药理学273 172-179
  • Wang D, Li L, Yang H, et al.(2013)组成型和rostane受体是一种促进环磷酰胺治疗造血系统恶性肿瘤的新靶点。血液121 329-338.
  • Ashley Ce,Carnes Ec,Phillips GK等人。(2011)通过噬菌体MS2病毒样颗粒通过细胞特异性递送多样的Cargos。ACS Nano5(7)5729-5745
  • 乙醇抑制大鼠肝细胞尿素生成:乙醛的作用。J临床生物化学287 (1) 7692 - 7700

一般肝细胞参考文献

  • 张志刚,等(2010)。微尺度原代人肝细胞培养物中持续性丙型肝炎病毒感染pnas..107(7),3141-3145。DOI:10.1073 / PNAS.0915130107。
  • malarkey,d。等。(2005)。新的洞察肝脏形态学的功能方面,毒物学的病理.33:27-34。Doi: 10.1080 / 01926230590881826。
  • Malhi,H.等。(2010)。肝细胞死亡:一个明确和呈现危险,physiol。录.90:1165 - 1194。Doi: 10.1152 / physrev.00061.2009。
  • lu,j.-n.,等。(2011)。在不同生物材料上长期冷冻保存人肝细胞的行为,人工器官.35: E65-E72。Doi: 10.1111 / j.1525-1594.2010.01191.x。