干细胞

干细胞简介

在癌症治疗、再生医学、移植和基础肿瘤学研究等领域,原代干细胞的应用已经变得非常普遍。尽管它们被广泛使用,但所产生的干细胞在任何实验室都是一种珍贵的商品。因为干细胞,无论是间充质干细胞、胚胎干细胞还是iPSC干细胞,通常用于下游实验,检测表面标记物表达、细胞分化和确定治疗潜力(初始接种密度),以及细胞样本大小,在这些细胞的使用中起着重要作用。

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Cellometer系列自动细胞计数器将基于图像的细胞计数和荧光检测整合到一个紧凑且易于使用的仪器中,该仪器可靠地自动化细胞计数、活力测定和其他荧光分析。通过简单地将20µL样品移液到一次性腔室中,Cellometer可获取细胞图像,并对其进行分析,以确定细胞计数、浓度、细胞大小和荧光强度,通常在30秒或更短的时间内,使其成为低体积样品的理想仪器。同样,需要20µL来执行GFP导入/转染效率、细胞周期分析或任何其他基于细胞的分析。

这些特性的结合使其成为干细胞研究的理想选择。使用亮场玻璃纤维计细胞计数器,用台盼蓝对样品进行计数和活性测定。我们的荧光纤维计细胞计数器和图像细胞仪系统将这种亮场功能与荧光检测相结合,还可以使用荧光染色剂(如碘化丙啶)来确定干细胞的活力,并能够准确地确定人类骨髓或脐血中有核细胞的浓度。荧光成像模式也可用于量化转染干细胞时GFP的转染效率。

干细胞的精确计数

分析在亮场模式下获得的细胞图像,以确定细胞总数。自动计算浓度,并自动保存或导出所有数据。这消除了用户对用户的可变性,提高了人工计数方法的吞吐量,特别是在分析可能是块状或不规则形状的干细胞时。

胚胎干细胞

图像板
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图1:Cellometer获得的胚胎干细胞(ES)图像。绿色的圆圈表示Cellometer软件已经计算过的细胞。

不规则和成簇的干细胞

图像板
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图2:细胞簇或不规则形状的细胞可以准确计数。绿色圆圈表示Cellometer软件已计数的细胞。

干细胞活力的自动测定

干细胞的生存能力可以通过几种方法来确定。台盼蓝染色的死细胞可以在brightfield模式下进行分析(图3)。通过荧光染料(如碘化丙啶(PI))检测活性可通过获取总细胞浓度的亮场图像和荧光图像来计数PI染色的死细胞来执行。

人骨髓间充质干细胞

图像板
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图3:经分析的人类间充质干细胞(HMSC)的brightfield图像显示活细胞以绿色圈起,台盼蓝染色的死细胞以红色圈起。

小鼠胚胎饲养细胞

图像板
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图4。亮场图像为MEF细胞,荧光成像模式下可见PI染色的死亡细胞。

骨髓干细胞-CD34+

图1:Cellometer获得的胚胎干细胞(ES)图像。绿色的圆圈表示Cellometer软件已经计算过的细胞。

量化GFP转染效率

当使用GFP等报告蛋白时,独特的亮场/荧光成像能力也可用于量化转染效率,而无需使用流式细胞术等复杂方法。在亮场模式下获取总计数,在荧光模式下计数GFP阳性细胞,以计算表达GFP的细胞百分比。

转染小鼠胚胎饲养细胞

图像板
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图8:经过转染的小鼠胚胎饲养细胞(MEF)。总细胞数在亮区图像(左)中确定,GFP阳性细胞在荧光图像(右)中用绿色圆圈表示。

干细胞在Cellometer上的分析结果

细胞类型 细胞浓度 细胞检测/活力
CD 34+ 4.81 x 106./毫升 PI生存率:74.3%
小鼠胚胎饲养细胞(MEF) 5.18 x 105./毫升 AO或AO/PI
小鼠胚胎饲养细胞(MEF) 2.48 x 106./毫升 台盼蓝生存率:92.1%
小鼠胚胎饲养细胞(MEF) 1.06 x 106./毫升 PI生存率:91.0%
转染小鼠胚胎喂养细胞(MEF) 总数:3.52 x 106./毫升
GFP:8.24 x 105./毫升
绿色荧光蛋白
人间充质干细胞(HMSC) 6.49 x 106./毫升 台盼蓝活力:91.4%
诱导多能干细胞(IPS) 7.51 x 105./毫升 台盼蓝生存率:37.9%
人脐血 1.40 x 107./毫升 AO或AO/PI
人骨髓 7.32 x 107./毫升 AO或AO/PI
成人心脏干细胞 3.30 x 105./毫升 台盼蓝活力:85.3%
人类胚胎干细胞 2.38 x 106./毫升 没有一个
转染人胚胎干细胞(HES) 1.23x106./毫升
RFP: 8.32×105./毫升
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