昆虫细胞

昆虫细胞分析简介

虽然有许多昆虫细胞被常规研究和用于研究,但最常见的是Sf9细胞系。最初来源于Spodoptera frugiperda(秋季粘虫)蛾,适于细胞培养。Sf9细胞对杆状病毒高度敏感,杆状病毒广泛用于在培养的昆虫细胞中表达特定基因。这些基因的表达导致Sf9细胞产生大量蛋白质。在这一蛋白质表达过程中,了解Sf9细胞的浓度和活力对于健康转染和强健的蛋白质生产至关重要。Cellometer系列仪器测量细胞浓度、活力以及细胞大小。因为细胞大小与健康的病毒感染和蛋白质表达有关,测量和监测细胞大小是监测细胞培养健康的有效工具。

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昆虫细胞系Sf9、Sf21和High 5的细胞大小和活力测定

Cellometer Auto T4用于计算细胞浓度、活力,并分析昆虫细胞的大小分布,如SF9、SF21和High 5。细胞大小分析用于监测感染前后的SF9培养。可以在同一直方图上显示多个单元格大小数据。

参考文献:“基于活细胞大小估计杆状病毒滴度的快速方法”,V.Janakiraman,W.F.Forrest,B.Chow,S.Seshagiri,分子生物学系,基因技术公司,生物统计系,基因技术公司,《病毒学方法杂志》,132,(2006),48-58

昆虫细胞计数程序

  1. 将昆虫细胞培养物与台盼蓝混合。
  2. 用移液管将20µl混合溶液移入一次性计数室(CHT4)的样品引入口。
  3. 将腔室滑块插入自动T4仪器。
  4. 获得细胞浓度、活力和细胞大小直径。

Cellometer软件自动成像和细胞识别

SF9细胞图像

图像板

平均单元尺寸等于18.3微米。(a) 原始数据图像和(b)计数的细胞用绿色圆圈表示活细胞,红色圆圈表示死细胞。

SF9细胞的活力

图像板

未感染和感染Sf9细胞的Cellometer Auto T4图像和活力分析。未感染的样本台盼蓝阳性细胞很少,因此有95%的存活率。被感染的样本有更多的台盼蓝阳性细胞,据报道有65%的存活率。

Cellometer自动T4生成未感染Sf9细胞的细胞大小直方图

图像板

成像细胞的细胞大小分布自动生成直方图。上面的直方图显示未感染Sf9细胞的数量和大小。大多数未感染的细胞直径在11到18微米之间。这些数据也可以导出到excel中进行进一步的数据分析。

Cellometer自动T4生成杆状病毒感染Sf9细胞的细胞大小直方图

图像板

成像细胞的细胞大小分布自动生成直方图。上面的直方图显示了感染杆状病毒的Sf9细胞的数量和大小。大多数受感染的Sf9细胞直径在17到30微米之间。这些数据也可以导出到excel中进行进一步的数据分析。

在Cellometer Auto T4上覆盖感染和未感染的Sf9细胞计数

图像板

Cellometer T4软件允许同时绘制多个总体。在上面的直方图中,受感染的细胞群与未受感染的细胞群重叠,以显示杆状病毒感染后细胞大小的变化。主要是细胞大小从平均15微米增加到平均25微米。

High Five(High 5)细胞的成像和计数

与Sf9和Sf21细胞类似,High Five细胞也用于表达各种蛋白质。这些松散地粘附在悬浮细胞系上的细胞可以很容易地在任何纤维测定仪上成像,以确定细胞浓度、活力和大小。

高5细胞

图像板

左侧显示亮场高5细胞图像,右侧显示计数细胞图像,计数细胞轮廓为绿色。

参考文献

Janakiraman V等人(2006年)。一种基于活细胞大小的杆状病毒滴度快速估算方法。病毒学方法杂志,132(1-2):48-58