吖啶橙/碘化丙啶的活力

细胞活力测量导论

由于细胞样本的质量对潜在的下游实验至关重要,生存能力的测量是许多实验室的常规操作。选择正确的方法进行细胞活力测定是获得一致准确结果的关键。本文综述了一种常用的细胞活力测定方法:吖啶橙/碘化丙啶。

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结核病和荧光

用吖啶橙/碘化丙啶(AO/PI)测定细胞活力

吖啶橙(AO)和碘化丙啶(PI)是核酸结合染料,可用于测定细胞活力。AO和PI都被认为是皮肤刺激物,如果摄入或吸入可能是有害的;它们目前还没有被列为致癌物。由于AO是细胞可渗透的,所有染色的有核细胞都产生绿色荧光。PI(~668道尔顿)只进入细胞膜受损的细胞,因此用PI染色的死亡、死亡和坏死的有核细胞产生红色荧光。当细胞同时被AO和PI染色时,活有核细胞只发出绿色荧光,而死有核细胞只发出红色荧光。这是由于Förster共振能量转移(FRET);PI信号吸收AO信号,不会产生溢出或双阳性结果。此外,其他膜排除活性染料如:溴化乙啶(EB)、7AAD、SYTOX绿/红、DRAQ5等也可替代PI。细胞活力是通过检测活细胞数与死荧光细胞数的比率来计算的。 This assay can not only be used to measure the viability of nucleated cells in cell culture and purified samples but also in complicated samples such as PBMC, whole blood, bone marrow, bronchoalveolar lavage, tumor digests, primary samples and many more.

外周血样本的亮场图像

外周血样本的亮场图像

有核活细胞用吖啶橙染色

有核活细胞用吖啶橙染色

碘化丙啶染色的有核死亡细胞

碘化丙啶染色的有核死亡细胞

AO/PI方案:样品制备和分析

简单,用户友好的Cellometer程序

使用Cellometer Vision, Auto 2000和K2只将20µl的样品添加到Cellometer计数室。样品的成像和分析在30秒内完成。可以查看明亮的视野和荧光细胞图像,以检查细胞形态和验证细胞计数。细胞总数,浓度和平均直径自动显示。

AO /π协议

  1. 获取Nexcelom AO/PI溶液:查看所有试剂
  2. AO/PI溶液1:1染色细胞
  3. 载荷计数箱滑动并分析
将20µl的样品移液到一次性载玻片中

1.将20µl的样品移液到一次性载玻片中

将玻片插入细胞计数仪

2.将幻灯片插入仪器

从下拉菜单中选择分析

3.从下拉菜单中选择分析

细胞计数数据

4.点击计数,获取图像并查看细胞计数,浓度,直径

使用AO/PI测量凌乱样本的生存力

肿瘤消化样品

肿瘤消化标本从肿瘤的原发部位采集。实体肿瘤在被用于实验之前首先被消化和处理。这些样本本来就很凌乱。它们可能含有组织碎片和细胞碎片,这使得识别和计数感兴趣的细胞变得困难。AO/PI只对有核细胞进行染色和分析。

消化肿瘤图像

消化肿瘤图像

白色Pak图片

白色Pak图片

脐带血的图片

脐带血的图片

单击编辑按钮更改此文本。白纹白血球和脐带血样本都含有大量的红细胞、血小板和细胞碎片,因此在明亮的视野下无法计数。利用AO/PI可测定单个核细胞的浓度和活力。

pbmc中生存能力的测量

外周血单个核细胞(PBMC)标本分离后、实验中以及冷冻保存前后的质量需要评估。右图为吖啶橙染色的活单核细胞(绿色),PI染色的死亡细胞(红色)。

了解更多关于PBMC»

PBMC的图片

PBMC形象

结论和Cellometer选择指南

该仪器的Cellometer线可以快速、准确地获得细胞样品的生存能力,台盼蓝或荧光法。此外,该系统自动报告准确的细胞计数,浓度和细胞大小在单个20µl检测。基于荧光的Cellometer仪器(Auto 2000、Vision和K2)也允许研究人员计算新鲜临床样本中有核细胞的总数,而不需要溶解红细胞。下表概述了推荐的Cellometer仪器和每种选择应用的分析用途。

Cellometer迷你 Cellometer汽车T4 Cellometer汽车1000 Cellometer汽车2000 Cellometer Vision / Vision CBA
纯化细胞-无碎片 结核病 结核病 结核病 结核病或AOPI 结核病或AOPI
分离的跨国公司-不溶红细胞 NR NR NR AOPI AOPI
新鲜BM, CB, WB,红细胞裂解的跨国公司
结核病 结核病 结核病 结核病或AOPI 结核病或AOPI
新鲜BM, CB, WB,未溶解 NR NR NR AOPI AOPI
冰冻BM, CB, WB 结核病 结核病 结核病 结核病或AOPI 结核病或AOPI
消化肿瘤和伴有组织/细胞碎片的BAL NR NR NR AOPI AOPI

AOPI =吖啶橙/碘化普罗迪,TB =台班蓝,NR =不推荐,BM =骨髓,CB =脐带血,WB =全血,MNCs =单核细胞

联系应用专家来决定哪个Cellometer是适合你的!