使用台盼蓝的可行性

介绍

由于细胞样品的质量对于潜在的下游实验至关重要,因此在许多实验室中常规进行活力测量。选择正确的传导细胞活力测量方法对于获得一致的准确结果是必不可少的。在这里,我们审查了一种测量细胞活力的常用方法:台盼蓝。

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TB对荧光

使用台盼蓝测量细胞活力

最早和最常见的测量细胞活力的方法之一是台盼蓝(TB)排除测定。台盼蓝是一种〜960道尔顿分子,即细胞膜不可渗透,因此仅进入具有受损膜的细胞。进入细胞后,Trypan Blue与细胞内蛋白质结合,从而使细胞成为蓝色。台盼蓝排除测定允许在给定人群中直接识别和枚举活(未染色)和死(蓝色)细胞。虽然台盼蓝已经用于确定细胞活力多年,但它并非没有其缺点。它被认为是致癌性的,必须用谨慎处理并正确处理。随着时间的推移耳盼蓝天然形成染料聚集体和晶体,因此建议在使用前使用0.2微米过滤器过滤Tb。最后,与荧光的检测方法相比,多个出版物观察到,在低于70%的样品中的样品中的样品中的蓝色活力测量较高的测量细胞活力1,2。数据表明,在具有低生存能力的样本上使用台盼蓝进行可存活率测量可能不是最佳的。我们建议锥虫蓝色测定理想地用于培养的细胞系和纯化/分离的细胞样品,具有大于70%的可挥发性。

Jurkat细胞用台盼蓝染色

台盼蓝协议:样品制备和分析

简单,用户友好的Cellometer程序

使用Cellometer Mini,Auto 1000,Auto T4,Auto 2000,K2和Vision

1。移液管20μl.2。插入幻灯片3.选择测定&单击“计数”
4.
。结果30秒!

台盼蓝协议

  1. 用PBS稀释股票(0.4%)至0.2%。
  2. 用0.2微米过滤器过滤台盼蓝
  3. 将细胞悬浮液混合在1:1,0.2%台盼蓝
  4. 将计数室加载到Cellomomer并分析

使用台盼蓝的纯化原代细胞系和细胞培养的可存活率测量

下面显示的显微照片代表培养的细胞和用台盼蓝染色的纯化的原代细胞,并在芯线器械上进行分析。用红色圆圈描绘的黑细胞代表死锥斑蛋白阳性阳性细胞。明亮中心的细胞被认为是活的。

使用Cellometer Mini,Auto 1000,Auto T4,Auto 2000,K2和Vision

ChO细胞由Cellometer Vision成像

由Cellometer Auto T4成像的Hela细胞

Cellometer Auto 2000成像的脾细胞

Cellometer Auto 1000成像Jurkat细胞

结论和Cellometer选择指南

电池仪仪表线可以快速准确地通过台盼蓝或荧光方法获得细胞样品的活力。另外,系统在单个20μl测定中自动报告精确的细胞计数,浓度和细胞尺寸。基于荧光的Cellometer仪器(Auto 2000,Vision和K2)还允许研究人员计算新鲜临床样品中的核细胞总数,而无需粘合红细胞。下表概述了每个所选应用程序的推荐的Cellometer仪器和测定使用。

Cellometer迷你 Cellometer自动T4. Cellometer自动1000 Cellometer Auto 2000. Cellorom Vision / Vision CBA
纯化细胞 - 没有碎片 TB. TB. TB. TB或AOPI. TB或AOPI.
孤立的MNC - 没有裂解RBCS NR. NR. NR. AOPI. AOPI.
新鲜的BM,CB,WB,MNCs W / RBCS的裂解 TB. TB. TB. TB或AOPI. TB或AOPI.
新鲜的BM,CB,WB无裂解 NR. NR. NR. AOPI. AOPI.
冷冻BM,CB,WB TB. TB. TB. TB或AOPI. TB或AOPI.
消化的肿瘤和组织/细胞碎片 NR. NR. NR. AOPI. AOPI.

AOPI =吖啶橙/产碘化物,TB = Trypan Blue,NR =不推荐,BM =骨髓,CB =脐带血,WB =全血,MNCs =单核细胞

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