主要细胞计数:准确性,一致性和敏感性

我见面的每个人都表现了主要的细胞计数想要优化他们花费这项任务的时间。他们还同意每次计数30秒听起来相当不错。那么为什么要移动到Cellometer自动化的细胞计数器?Cellometer提供30秒的电池计数,并且独特地设计成在动态浓度范围内精确地进行准确[10 ^ 5个细胞/ ml-10 ^ 7个细胞/ ml]和细胞尺寸[2微米300微米]。研究原代细胞的研究人员的最佳部分是Cellometer在PBMC等样品中脱簇和准确地计算块状细胞的能力。尽管如此,我听到科学家考虑适应或改变原发性小区计数的工作流程之前的三种类型的问题。

准确性:有血小板?

在大多数实验室处理PBMCS中,用户经常提醒我,他们有优异的RBC样本的协议。更常见的是,我们发现是PBMC隔离的最常见的痛点不是残留的RBC,而是血小板。如果工作流程是新鲜PBMC的隔离,则变得很重要,进入下游实验。

主要细胞计数图像

在Cellometer的工作流程中,我们使用双荧光核染料,吖啶橙(AO)和碘化丙啶(PI)倡导。用AO / PI方法染色不包括碎片,非核细胞(如RBC和血小板),并且在样品中提供总核细胞的信息,而不管隔离技术或源。(见上图)。Cellometer AO / PI工作流程不需要孵化。

一致性:丛中有多少个细胞?

我的大多数My Cellometer用户训练使用血细胞计数计计算细胞,这是1852年开发的方法。虽然该方法简单且被认为是通用金标准;在用户之间实现一致性变得非常困难和主观。血细胞计数计不捕获图像,也不容易计数像PBMC等细胞的异质混合物。

样品 CELLOMER. 血细胞计数
1 1.73 1.12
2 1.90 1.03
3. 1.77 1.01
4. 1.77 0.80
5. 1.63 1.04
Avg. 1.76 1.00
STDV. 0.10 0.12
简历 5.55 12.05

通过AO / PI染色方法,活细胞将表现出绿色荧光信号,而死亡PI +电池将表现出红色信号(观看视频)。使用Cellometer工作流程,您正在删除主观性或操作员偏置。在我的经验中,使用正确的单元计数器,用户之间的CV从用户的CV从大于25%到少于10%。在上表中,使用液晶计和血细胞计量(经验丰富的运营商)计算PBMC(样品#4)。Cellower提供了最准确和一致的方法,%CV小于6%。重要的是要注意,提供的PBMC样品非常丛,并且很难通过眼睛精确地计数细胞。Cellometer的强大算法将有助于确保仅计算核心的细胞,而残留的RBC或血小板不会歪斜您的细胞计数。

用RBC污染计数的主要细胞

敏感性:扔掉我的台盼蓝?

我遇到了几种细胞疗法工作流程(新鲜,冷冻保存,长期通道),其中生存能检查点指示冷冻保存,在实验测试受试者和其他实验标准中注射的细胞数。使用台盼蓝(TB)的生存方法来计算主要细胞的后果。用于手动计数的TB方法往往会高估或膨胀样品的“活力”,特别是当样品小于70%时。这可能是一个令人担忧的原因,因为当前行业标准确认患者给药的最低活力时,这是70%的可行性。我们觉得使用AO / PI(绿色或红色)的决定而不是与蓝色的多种不同色调(或浓度)的蓝色(即台网盼蓝方法)一起去除一层复杂性。工作流程也具有成本效益(20美分/计数)。

比较氟化单元计数器的选项

在此查看有关TB VS AO / PI的更多信息。

想要了解有关台盼蓝的敏感性的更多信息与AO / PI工作流程?为我们即将推出的博客文章留下来“为什么你使用Trypan Blue来确定冻土的活力?”