视频:3D肿瘤球形功能测定 - 侵入matrigel

欢迎来到Celigo图像cytometer视频演示系列。今天我们将讨论3D肿瘤球形功能测定,特别是侵袭Matrigel。

Celigo cytometer已被用于进行多种基于3D肿瘤球体的功能测定。这段视频描述了一种3型侵袭Matrigel作为肿瘤侵袭的模型。

让我告诉你这个实验是如何进行的。

实验设计

在U-底部96孔超低附接板上以每孔1000个细胞接种胶质母细胞瘤U-87mg细胞。在接下来的4天内形成球状体。

在第4天,用连续稀释的17℃药物处理或DMSO载体对照嵌入Matrigel中,将U-87mg球体嵌入Matrigel中。为每个条件制备六次重复。板材现在准备好成像。

在整个实验中携带自动图像采集和量化。在Matrigel嵌入后和右侧进行成像 - 这被认为是实验的时间点 - 零,然后在药物治疗开始后再次在24小时,48小时和72小时。

在这里,我们可以看到图像分析后的典型扫描结果看起来像。整个板显示每个成像的拇指指甲图像。

在t = 0 h处控制球状体和t = 48小时

该板代表药物治疗的零时间。让我们看看车辆控制井D10。

蓝色轮廓表示由Celigo软件识别的球体占据的区域。

绿色填充色是计数球体的另一种视觉表示。接下来让我们看看48小时后的同一个球体。侵入细胞所占的面积比时间零点大得多。

T = 48 H控制和药物处理的球体

在该板上的其他孔中,用不同浓度的17°AAg处理球状体。在板上的任何良好良好之间导航,以便在实验条件之间快速检查差异。在这孔中,我们发现将侵入Matrigel抑制2.5μm药物处理。如您所见,我们可以通过药物治疗浓度来看看不同条件的不同井,并快速全球视图和了解进行的实验,然后将其与控制进行比较。

将数据导出为Excel

通过将数据导出到Excel,我们可以查看为整个板的获得结果。使用Confluence应用程序,软件将由球状面积覆盖的区域的百分比计算到总扫描区域。入侵是归零的标准化。可以轻松创建图形和表格以反映从实验中收集的数据。当我们比较由控制球体或药物处理的球状体覆盖的区域时,我们观察到U-87mg细胞的侵袭被剂量依赖的方式抑制17-AAG。

其他3D测定

在Celigo上执行的其他3D功能测定包括:

迁移细胞外基质

肿瘤球状活力(Calcein AM / PI)

肿瘤球体/胚状体对抗培养

参考:Vinci等。BMC生物学2012,10:29